急性髓細胞白血病細胞和分子遺傳學特征.pdf

1、[目的]：
　　 1.單中心研究中國4241例初治急性髓細胞白血病(denoAML)患者細胞遺傳學分布特征，比較與亞洲其他國家和西方國家差異。
　　 2.研究430例初治AML患者16種基因突變發(fā)生率，分析基因突變與患者臨床資料、MICM分型、危險分組及對預后的影響。
　　 3.研究EZH2基因突變在714例AML患者中發(fā)生率和臨床意義。
　　 [方法]：
　　 1.分析1985年4月至2010年

2、11月于蘇州大學附屬第一醫(yī)院4196例經MICM分型確診的初治AML患者骨髓細胞遺傳學特征。采用R顯帶核型分析技術，并按照國際人類細胞遺傳學術語命名法(ISCN2009)進行核型突變命名。
　　 2.采集430例AML患者骨髓單個核細胞，采用基因組DNA-PCR方法擴增C-KIT、NPM1、FLT3-TKD、FLT3-ITD、MLL-PTD、EZH2、RUNX1、ASXL1、IDH1、IDH2、NRAS、CBL、WT1、TET2

3、、DNMT3和JAK2基因，采用直接基因測序分析基因突變。隨訪患者臨床與實驗室資料及療效、復發(fā)及長期生存情況。
　　 3.對714例AML患者骨髓單個核細胞基因組DNA進行PCR方法擴增EZH2基因2～20外顯子，并通過DNA直接測序法檢測EZH2的突變，并分析EZH2基因突變和患者臨床特征相關性及對預后的影響。
　　 [結果]：
　　 1.單中心中國急性髓細胞白血病細胞遺傳學特征
　　 4196例AML

4、患者(98.9％)成功的進行了細胞遺傳學的分析，其中2405例(57.3％)患者核型異常，并檢測出65種新的核型異位突變。在各種核型異常中，t(15;17)居于首位，占19.3％，其次為t(8;21)(14.3％)、復雜核型(5.3％)、+8(3.2％);本中心t(15;17)和t(8;21)異常比例與其他東亞國家相似，均明顯高于北歐和美國;與西方國家相比，M3亞型比例偏高，而M4亞型比例偏低。
　　 2.16種基因突變的發(fā)生率

5、及其臨床意義。
　　 430例AML患者中，77.2.0％患者具有一種及一種以上基因突變發(fā)生，而在正常核型中，基因突變比例高達84.3％。RUNX1和IDH1傾向于發(fā)生在老年人(P=0.004，P=0.038)，而MLL-PTD絕大多數發(fā)生于男性(12/14，85.7％)。NPM1(P＜0.0001)，FLT3-ITD(P＜0.0001)、DNMT3A(P=0.021)突變與血象高白細胞(30.0×109/L)具有明顯的相關性;

6、MLL-PTD(P＜0.0001)和EZH2(p=0.023)突變的發(fā)生與患者初診時骨髓原始細胞比例低于30％具有顯著相關性;MLL-PTD(P＜0.0001)，RUNX1(p=0.015)突變絕大多數發(fā)生于髓單核性免疫表型AML;73.5％C-KIT突變發(fā)生于CBF陽性AML(P＜0.0001)，81.1％NPM1、63.8％IDH2和85.2％DNMT3A突變發(fā)生于正常核型AML.
　　 各基因突變相關性分析顯示，NPM1突

7、變與FLT3-ITD(37/99，P＜0.0001)、IDH1(13/20,P＜0.0001)、IDH2(24/47,P＜0.0001)、TET2(17/47,P=0.007)和DNMT3A(18/27，P＜0.0001)突變具有顯著相關。
　　 預后分析顯示存在FLT3-ITD、IDH1和NRAS突變患者CR率明顯低下，P值分別為0.007、0.031和0.031，FLT3-ITD、NRAS突變和危險分組是CR率的獨立影響因素

8、(P＜0.0001，p=0.003，P=0.006respectively);Kaplan-Meier生存分析發(fā)現NPM1、FLT3-ITD、MLL-PTD、RUNX1、IDH1、IDH2、NRAS和DNMT3A突變患者與不良預后相關，無病生存率(EFS):P=0.0148，P=0.0164，P=0.0018，P=0.0015，P=0.0213，P=0.0116，P=0.0001，P＜0.0001;總生存率(OS:P=0.0077，P=

9、0.0039，P=0.0177，P=0.0150,P=0.0014,P=0.0159,P＜0.0001,P=0.0001。
　　 多因素Cox回歸分析顯示，FLT3-ITD、NRAS、IDH2突變，年齡和危險分類是獨立預后因素，EFS:P值分別為P＜0.0001、0.029、0.046、＜0.0001、＜0.0001;OS:P值分別為＜0.0001、0.001、0.005、＜0.0001、＜0.0001。
　　 3.EZ

10、H2發(fā)生率及其臨床意義。
　　 714例AML患者中，13例檢測到EZH2基因突變，突變率為1.8％，更易存在于男性(11/13)，具有統(tǒng)計學意義(P=0.033)。單因素分析顯示骨髓原始細胞＜30％組EZH2突變率為14.3％(4/28)，而原始細胞≥30％組患者EZH2突變率僅1.3％(9/686)，兩者存在著顯著的差異(P＜0.0001)。具有-7和7q-核型異常的患者EZH2突變率(2/22，7.7％)明顯高于不伴有-7

11、和7q-核型異常者(11/672，1.65％)，(P=0.025)。
　　 雖然EZH2突變組患者無病生存時間和總生存時間均低于野生組，但EZH2突變對AML患者CR率、無病生存率(EFS)和總生存率(OS)影響無統(tǒng)計學意義，p值＞0.05。因EZH2突變發(fā)生在AML患者為小概率事件，經預后加權分析后顯示，EZH2突變對預后的影響尚不能定論。
　　 [結論]：
　　 1.與西方國家相比，我單位AML患者發(fā)病年齡更

12、加年輕。東亞地區(qū)AML患者更傾向于FABM3亞型及預后較好細胞核型，t(15;17)和t(8;21)。
　　 2.基因突變與AML的臨床特征具有一定相關性并且是AML預后重要影響因。
　　 3.EZH2突變作為AML患者重現性基因遺傳學異常，與發(fā)病時骨髓原始細胞比例低于30％及-7/del(7q)核型異常具有顯著相關性，其對預后的影響尚不清楚。
　　 4.對AML預后危險分組評估和個體化治療方案的制定過程中，應該