負(fù)載表柔比星殼聚糖微球的制備及單純與聯(lián)合微波消融治療小鼠皮下肝移植瘤療效觀察.pdf

1、背景:
　　 癌癥已嚴(yán)重危害人類的健康,成為人類殺手之一,居常見死亡因?yàn)榈氖孜弧Ｊ澜缧l(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì),每年世界上有1000萬(wàn)人患上癌癥,而死于癌癥的人數(shù)約600萬(wàn),占全球死亡人數(shù)的12％。我國(guó)每年新增癌癥患者180萬(wàn),死亡140萬(wàn),平均每3分鐘就有1.3人死于癌癥,而且癌癥的發(fā)病率呈急劇上升趨勢(shì)。原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率及死亡均較高,據(jù)統(tǒng)計(jì)每年全球肝癌發(fā)病率位居惡性瘤發(fā)病率的第5位,死亡率位居第3位[1],

2、而我國(guó)是肝癌高發(fā)區(qū),據(jù)統(tǒng)計(jì)55％發(fā)生在我國(guó),發(fā)病率及死亡率均較高,其進(jìn)展迅速、生存質(zhì)量差,是迄今全部腫瘤中治療效果較差的惡性腫瘤之一,而且大部分確診已屬晚期,手術(shù)切除率低,對(duì)全身化療及放療均不敏感,且全身化療存在靶向性差、療效不佳、毒副作用大等缺點(diǎn),肝癌的局部、聯(lián)合治療成為重要治療途徑及研究熱點(diǎn)。微波是一種高頻電磁波,組織中的極性分子(主要是水分子、帶電離子和膠體蛋白)在微波作用下發(fā)生振蕩摩擦產(chǎn)生局部高溫,使腫瘤組織凝固性壞死,肝癌組織

3、具有含水豐富的特點(diǎn),在超聲引導(dǎo)下將微波天線左右,插入肝癌組織內(nèi)部,可短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生高達(dá)65℃-100℃左右的高溫,從而使肝臟腫瘤組織壞死。但臨床上往往存在消融不徹底、較易出現(xiàn)局部病灶殘留及復(fù)發(fā)等弊端,因此微波聯(lián)合治療成為肝臟腫瘤治療的重要局部治療方法。
　　 控釋緩釋劑(controlled-and sustained-release drugs)屬于第三代藥物劑型,將傳統(tǒng)的藥物包埋于基質(zhì)或載體,利用基質(zhì)的吸附、增粘、支架粘連或膜

4、屏障等作用,提高藥物穩(wěn)定性,降低血濃峰谷現(xiàn)象,延緩藥物釋放速度,提高藥物靶向定位,使藥物吸收變慢、作用延長(zhǎng)、毒性降低,提高藥效和安全度,解決了傳統(tǒng)藥物尤其是抗腫瘤藥物半衰期短、難于長(zhǎng)期間維持血藥濃度、全身毒副作用大、病人較難耐受等缺點(diǎn),是目前抗腫瘤藥物研究的重要發(fā)展趨勢(shì),并可為尋找新的治療方法提供方向[2-4]。藥物的靶向作用根據(jù)其機(jī)制不同可分為以類:①主動(dòng)靶向,將抗體或配體等特異性的靶向分子偶聯(lián)至粒子表面而使藥物定向分布到靶組織,是根

5、據(jù)生物免疫靶向理論設(shè)計(jì)靶向給藥系統(tǒng)；②物理化學(xué)靶向,是根據(jù)藥物微?；蛘咚幬镙d體微粒表面電荷、表面疏水和表面吸附大分子的不同,可以達(dá)到不同的器官以實(shí)現(xiàn)靶向；③被動(dòng)靶向,依據(jù)載體的理化性質(zhì)(大小、形狀、親水性、表面電荷和囊壁孔徑等)進(jìn)行藥物的分布和釋放,用對(duì)機(jī)體各種組織和病變親和力不同的微粒也可達(dá)到靶向的目的,是根據(jù)機(jī)體的組織生理學(xué)特性對(duì)不同大小微粒的滯留性不同,選擇性地聚集于肝、脾、肺、淋巴部位釋放藥物而發(fā)揮療效,以將藥物制成不同大小的微

6、粒實(shí)現(xiàn)對(duì)于不同器官組織的生物物理靶向,或者將藥物包裹于可生物降解的生物相容性高分子粒子中以實(shí)現(xiàn)緩釋與生物物理靶向。靶向給藥可以減少抗腫瘤藥物與非靶向器官、組織及細(xì)胞的非特異性相互作用,從而增加靶部位/非靶部位的藥物比率,提高了抗腫瘤藥物療效的同時(shí),降低了藥物的毒副反應(yīng)。
　　 本實(shí)驗(yàn)以殼聚糖為載體,包裹表柔比星從而制備成殼聚糖載藥微球。殼聚糖微球是目前實(shí)際應(yīng)用較多的藥物緩釋形式,殼聚糖微球系指藥物溶解或分散在載體中形成的微小球型

7、實(shí)體,粒徑范圍在1～250μm。殼聚糖(Chitosan,CS)是一種廣泛存在于自然界的聚陽(yáng)離子多糖衍生物,又稱可溶性甲殼質(zhì)、甲殼胺、幾丁聚糖等,由D-氨基葡萄糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖組成,是以β-(1,4)糖苷鍵連接起來(lái)的直鏈多糖,化學(xué)名為(1,4)-2-氨基-2-脫氧-β-D-葡萄糖,其結(jié)構(gòu)類似于纖維素。殼聚糖是天然多糖中唯一的堿性多糖,具有良好的生物相容性和可降解性,具有獨(dú)特的物理化學(xué)特性和生物學(xué)功能,其分解產(chǎn)物無(wú)毒。用CS制

8、備的靶向制劑具有緩釋、控釋、靶向釋放藥物、增加藥物吸收、提高藥物的生物利用度,降低藥物毒副作用等特點(diǎn),并可選擇性地與腫瘤細(xì)胞聚集,發(fā)揮其抗腫瘤作用[8-9]。多柔比星為蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素,因其抗瘤譜廣其主要毒副作用為心臟毒性.可導(dǎo)致嚴(yán)重的心肌損傷和心力衰竭,且損傷程度和劑量有密切關(guān)系,減少其心臟毒性的主要方法就是應(yīng)用藥物載體,改變的生物分布,減少在全身特別是心臟組織中的分布,提高其在局部腫瘤中的含量[5]。
　　 本研究選用CS

9、作為原材料,采用W/O型乳化-固化法制備表柔比星-殼聚糖微球,檢測(cè)微球的理化性質(zhì),通過(guò)單純瘤內(nèi)注射來(lái)治療小鼠肝移植瘤,觀察其對(duì)腫瘤的抑制作用,進(jìn)一步與微波消融治療相結(jié)合,探討其聯(lián)合治療肝移植瘤的療效,以期尋找新的抗肝腫瘤聯(lián)合治療方法,并為今后臨床應(yīng)用研究提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 1.制備負(fù)載模型藥物表柔比星(EPI)的殼聚糖微球(CS)并檢測(cè)載藥微球的粒徑大小和體外釋藥性能。
　　 2.對(duì)移植瘤小鼠進(jìn)行

10、體內(nèi)抑瘤試驗(yàn),證明負(fù)載表柔比星的殼聚糖微球較普通抗癌藥物具有更好的體內(nèi)抑瘤作用。
　　 3.殼聚糖微球聯(lián)合微波消融治療小鼠移植瘤,證實(shí)其與單獨(dú)微波治療相比能獲得較高的抑瘤率；探討殼聚糖載藥微球聯(lián)合微波消融治療肝癌的可行性。
　　 方法:
　　 1.采用W/O型乳化-固化法制備表柔比星-殼聚糖微球,掃描電鏡觀察殼聚糖微球的表面形態(tài),并計(jì)算粒徑大小。利用紫外分光光度計(jì)通過(guò)動(dòng)態(tài)透析法分析載藥微球的包封率、載藥量及藥物累

11、積釋放率。
　　 2.采用傳代腹水H22細(xì)胞接種昆明小鼠皮下,制備H22皮下肝癌荷瘤小鼠模型,設(shè)載藥殼聚糖微球、游離藥物、殼聚糖和生理鹽水四組,給藥后開始監(jiān)測(cè)腫瘤體積大小,2周后處死小鼠,剝離瘤體、稱重,計(jì)算抑瘤率。
　　 3.建立皮下移植瘤模型后,對(duì)局部皮下肝移植瘤進(jìn)行微波消融治療,其后瘤內(nèi)注射上述四組藥物,瘤內(nèi)給藥后開始監(jiān)測(cè)腫瘤體積大小,2周后處死小鼠,剝離瘤體、稱重,計(jì)算抑瘤率,免疫組化監(jiān)測(cè)凋亡因子Bcl-2、ba

12、x表達(dá)。
　　 4.采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包,試驗(yàn)結(jié)果表示為((x)±s),組間差異性統(tǒng)計(jì)采用one-way ANOVA,經(jīng)Levene方差齊性檢驗(yàn)后,若方差齊,采用LSD法進(jìn)行多重比較,若方差不齊,采用Dunnett's法進(jìn)行多重比較,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.配制2％的殼聚糖溶液,CS/EPI質(zhì)量比為8:1,制備的載藥微球呈圓形或橢圓形,分散性良好,平均粒徑105

13、μm,大小較一致,包封率約為80％,載藥率約為11％,2周的累積緩釋率為84％。
　　 2.瘤內(nèi)注射生理鹽水、殼聚糖、表柔比星、載藥微球后,通過(guò)觀察腫瘤體積變化大小、抑瘤率、檢測(cè)凋亡因子,表明殼聚糖微球是一種有效的表柔比星局部緩釋劑型,具有較好的抗腫瘤作用。
　　 3.微波聯(lián)合瘤內(nèi)注射生理鹽水、表柔比星、載藥微球的抑瘤率分別為8％,20％,47％。表明殼聚糖微球聯(lián)合微波消融治療有較強(qiáng)的抑瘤作用。
　　 結(jié)論: