毛竹Mariner-like轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座特性分析.pdf

1、轉(zhuǎn)座子(transposon,Tn),又叫轉(zhuǎn)座因子(transposable element, TEs)、跳躍因子、可移動基因、跳躍基因,是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位,實質(zhì)是在細胞中能從同一條染色體上的一個位點“跳”到另一個位點,或者從一條染色體轉(zhuǎn)移到另一條染色體上的DNA序列。
　　本研究將之前分離得到的兩個具有完整轉(zhuǎn)座酶結(jié)構(gòu)的毛竹 MLE轉(zhuǎn)座子 Phmar1和Phmar2和與之對應(yīng)的非自主的轉(zhuǎn)座子Phmar

2、1NA和Phmar2NA構(gòu)建到帶有綠色熒光蛋白基因的植物表達載體pBIN m-gfp5-ER上,然后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對野生型擬南芥進行遺傳轉(zhuǎn)化。再對T1代植株進行篩選和鑒定。利用熒光觀察和PCR擴增的方法,在確定的轉(zhuǎn)基因植株中發(fā)現(xiàn)含有毛竹MLE轉(zhuǎn)座子Phmar1和Phmar2的轉(zhuǎn)基因植株出現(xiàn)了轉(zhuǎn)座現(xiàn)象,而含有非自主轉(zhuǎn)座子Phmar1NA和Phmar2NA的轉(zhuǎn)基因植株則沒有。結(jié)果表明了毛竹MLE轉(zhuǎn)座子Phmar1和Phmar2是具有轉(zhuǎn)活性

3、的,并且可以在模式植物擬南芥中發(fā)生異源轉(zhuǎn)座。
　　再對轉(zhuǎn)基因植株中Phmar1和Phmar2轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座足跡和插入位點進行分析,發(fā)現(xiàn)兩種轉(zhuǎn)座子都會在轉(zhuǎn)座過程中留下轉(zhuǎn)座足跡,并且會轉(zhuǎn)座到擬南芥基因組的其他位置。再用生物信息學(xué)軟件對轉(zhuǎn)座足跡序列進行分析,發(fā)現(xiàn)Phmar1和Phmar2轉(zhuǎn)座子的剪切過程是不同,從而可以判斷這兩個轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座特性不同。
　　本研究是首次將竹亞科MLE轉(zhuǎn)座子在擬南芥中進行異源轉(zhuǎn)座,并成功分析了轉(zhuǎn)座特性,