柞蠶核型多角體病毒分子生物學(xué)及桿狀病毒感染特性.pdf

1、把感染柞蠶腎的ApNPV進(jìn)行分離純化,提取較純凈的ApNPV,抽提ApNPV基因組DNA,并對ApNPV構(gòu)建了HindⅢ、SalⅠ兩種限制性內(nèi)切酶的DNA片段文庫,進(jìn)行了部分基因的序列分析,為該病毒的全基因組序列的進(jìn)行打下了基礎(chǔ).對ApHPV、w-BmNPV(野桑蠶)、BmNPV進(jìn)行RAPD分析,研究結(jié)果表明,ApNPV與CfNPV的進(jìn)化關(guān)系最近,與w-BmNPV的親緣關(guān)系較遠(yuǎn),與BmNPV的親緣關(guān)系最遠(yuǎn).為了便于檢測核型多角體病毒對昆

2、蟲的感染情況,將熒光標(biāo)記分子GFP克隆到昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK8中,與經(jīng)Bsu36I酶切線型化的Ac-BacPAK6共轉(zhuǎn)染Sf21細(xì)胞,經(jīng)空斑純化獲得重組病毒Ac-BacPAK6-GFP.可以檢測病毒在不同細(xì)胞中的增殖和在蟲體的不同組織中的增殖.把單一的病毒粒子分別感染BmN和Sf21細(xì)胞作為對照,同時(shí)把不同的病毒粒子混合,再分別感染BmN和Sf21細(xì)胞.研究結(jié)果表明:ApNPV病毒不能感染BmN和Sf21細(xì)胞.當(dāng)其DNA單

3、獨(dú)轉(zhuǎn)染到細(xì)胞時(shí),細(xì)胞在不同程度上表現(xiàn)出凋亡癥狀,這是病毒與細(xì)胞之間不親和的表現(xiàn);AcMNPV和BmNPV在親和的病毒的協(xié)同下,分別能在BmN和Sf21細(xì)胞中復(fù)制.BmNPV在單獨(dú)感染Sf21細(xì)胞時(shí)表現(xiàn)出的個(gè)別細(xì)胞有類似多角體的顆粒的現(xiàn)象,有待構(gòu)建重組GFP的BmNPV以進(jìn)一步證實(shí);AcMNPV和BmNPV的病毒粒子可以進(jìn)入BmN及Sf21細(xì)胞,并能釋放出DNA,這是以前試驗(yàn)并沒有注意到的;ApNPV的部分序列的同源性分析表明,與CfNP