河南省PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查及體外抗病毒中藥單體的篩選.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種豬的急性高度接觸性傳染病。目前主要依靠接種疫苗來(lái)對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防，尚無(wú)有效的治療藥物。且近年來(lái)，變異的 PRRSV毒株不斷出現(xiàn)，給 PRRS的預(yù)防和治療帶來(lái)了更大的困難。因此，對(duì) PRRSV變異情況的實(shí)地實(shí)時(shí)監(jiān)控及找到有效治療藥物成為防治PRRS的重中之重。
　　本研究收集河南省部分地區(qū)的82份陽(yáng)性PRRS病料，應(yīng)用RT-PCR方法分別擴(kuò)增其 PRRSV

2、的 ORF5全基因和 Nsp2部分基因，進(jìn)行測(cè)序比對(duì)分析，尋找PRRSV毒株的變異特點(diǎn)。結(jié)果表明：82份陽(yáng)性病料的 ORF5基因核酸序列間同源性為94.2％～100%；與美洲型株 VR-2332、國(guó)內(nèi)變異株 JXA1及歐洲型株 LV的同源性分別為86.9%～89.7%，95.7%～99.7%及60.8%～66.3%。所擴(kuò)增的Nsp2基因與VR-2332的相比均存在著兩個(gè)位點(diǎn)、90個(gè)堿基的缺失，提示河南省新近流行毒株基本均為高致病性 PR

3、RSV。本研究對(duì)河南地區(qū)新近流行的 PRRSV毒株的 ORF5和 Nsp2基因的變異情況進(jìn)行了調(diào)查監(jiān)測(cè)，為 PRRS區(qū)域性防控措施的制定與實(shí)施提供了理論基礎(chǔ)。
　　為科學(xué)地找尋對(duì) PRRSV有效的中藥單體及其有效濃度，本研究選擇了十味中藥單體在體外（Marc-145細(xì)胞上）以三種方式，即先給藥再接毒（阻斷吸附）、先接毒再給藥（抑制復(fù)制）和先將毒和藥作用再作用細(xì)胞（直接殺滅）進(jìn)行抗病毒研究，以 CPE、病毒滴度、MTT法測(cè)得的 OD

4、值為監(jiān)測(cè)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)藥物抗 PRRSV的效果。
　　結(jié)果顯示：該實(shí)驗(yàn)毒株的 TCID50為10-5.5,初篩出的有效中藥單體有四種：綠原酸、黃芩苷、奎寧酸和連翹苷。它們對(duì) Marc-145細(xì)胞的安全濃度分別是160μM，20μM，3000μM，100μM。對(duì) PRRSV都有很好的阻斷吸附效果（保護(hù)率均在50%以上）；100μM的綠原酸和連翹苷抑制PRRSV復(fù)制的作用明顯；奎寧酸、綠原酸和連翹苷對(duì) PRRSV有較好的直接殺滅效果。綜合