基于納米薄膜構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)甲胎蛋白(AFP)的新方法研究.pdf

1、腫瘤已經(jīng)成為危害人類(lèi)健康的高危疾病，甲胎蛋白（AFP）是國(guó)際公認(rèn)的常用的腫瘤標(biāo)志物，已被廣泛用于肝癌、生殖系統(tǒng)腫瘤和胚胎性腫瘤等疾病的輔助診斷。電化學(xué)免疫傳感器基于免疫分析技術(shù)，克服了傳統(tǒng)分析技術(shù)（如酶聯(lián)免疫分析法等）靈敏度不高等局限性，具備靈敏度高、選擇性好、價(jià)格低廉、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，在臨床和生物領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，已經(jīng)成為了國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。本研究提出將電化學(xué)免疫傳感器技術(shù)應(yīng)用于 AFP的檢測(cè)，而生物活性物質(zhì)在電極表面的有效

2、固定是該檢測(cè)新技術(shù)的關(guān)鍵。本文運(yùn)用了兩種不同的方法制備納米薄膜修飾電極固定抗體，構(gòu)建新型的電化學(xué)免疫傳感器，用于 AFP的檢測(cè)，獲得了較滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　首先，本文利用電聚合將聚鈣羧酸修飾于電極表面，聚鈣羧酸表面的活性基團(tuán)（羧基）通過(guò)碳化二亞胺試劑（EDC+NHS）將AFP單克隆抗體（Ab1）固定于電極表面，根據(jù)抗體-抗原反應(yīng)，構(gòu)建檢測(cè)AFP的夾心型電化學(xué)免疫傳感器。利用掃描電鏡（SEM）、電化學(xué)交流阻抗（EIS）和循環(huán)伏安法

3、（CV）等對(duì)電極制備過(guò)程進(jìn)行表征，并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較高的靈敏度、較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定 AFP的檢測(cè)范圍為0.5~200ng·mL-1，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)限為0.5ng·mL-1,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.6％。
　　此外，本文采用滴涂法將殼聚糖-碳納米管（CS-CNT）納米復(fù)合材料修飾在玻碳電極表面，在戊二醛的橋聯(lián)作用下，固定抗體，根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)，構(gòu)建檢測(cè)AFP夾心型電化學(xué)免疫傳

4、感器。通過(guò)循環(huán)伏安法對(duì)電極制備過(guò)程進(jìn)行表征，并優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法制備的電化學(xué)免疫傳感器具有靈敏度高，選擇性好和穩(wěn)定性高的特點(diǎn)。在最佳優(yōu)化條件下，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)限為0.05ng·mL-1，其響應(yīng)信號(hào)與AFP抗原濃度在0.05~20 ng·mL-1和20~200 ng·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為9.6%。
　　最后，本研究應(yīng)用以上兩種不同修飾方法制備的電化學(xué)免疫傳感器，對(duì)血清樣品的 AFP進(jìn)行檢