InnVit基因?qū)谒丶?xì)胞生物學(xué)功能的影響及其分子機(jī)制.pdf

1、白癜風(fēng)是一種色素脫失性皮膚病,以表皮、粘膜和毛發(fā)的黑素細(xì)胞脫失形成的白斑、灰白發(fā)為主要癥狀,其發(fā)病機(jī)制存在自身免疫學(xué)、氧化應(yīng)激學(xué)、神經(jīng)學(xué)以及遺傳學(xué)等多種假說。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外大量研究表明白癜風(fēng)的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān),可能是一種多基因遺傳病。
　　 據(jù)報(bào)道InnVit基因是與白癜風(fēng)患者的黑素細(xì)胞表達(dá)下調(diào)相關(guān)的新基因。通過序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)InnVit基因?yàn)槿鄙?1bp內(nèi)含子的FBXO11基因。為了探討InnVit基因在黑素細(xì)胞中的生物學(xué)

2、功能,明確InnVit基因在白癜風(fēng)中的作用,本論文構(gòu)建了沉默InnVit基因的siRNA及InnVit基因過表達(dá)載體p3XF-P120,研究InnVit基因的抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)活性及酪氨酸酶輸出的影響。
　　 論文通過設(shè)計(jì)構(gòu)建了人工合成的特異性siRNA,同時(shí)構(gòu)建了該基因的過表達(dá)質(zhì)粒,同時(shí)分別轉(zhuǎn)染黑素細(xì)胞,從而研究InnVit基因抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)功能及黑素細(xì)胞酪氨酸酶表達(dá)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出的的影響。
　　

3、 首先,檢測(cè)了InnVit基因mRNA和蛋白的表達(dá),siRNA的抑制作用顯著降低了InnVit基因mRNA和蛋白的表達(dá)量,p3XF-P120質(zhì)粒的過表達(dá)顯著增加了InnVit基因mRNA和蛋白的表達(dá)量。
　　 其次,InnVit基因抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞增殖、凋亡及遷移相關(guān)生物學(xué)功能的影響。采用siRNA抑制和質(zhì)粒載體過表達(dá)后,InnVit基因的過表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡;InnVit基因的抑制使黑素細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)從G0/G

4、1期到S期的細(xì)胞周期停滯現(xiàn)象,極大地降低了細(xì)胞增殖和存活的能力,同時(shí)顯著增加黑素細(xì)胞的早期凋亡水平。細(xì)胞遷移能力及酶活性檢測(cè)表明,siRNA抑制和過表達(dá)InnVit基因?qū)?xì)胞遷移力及2金屬蛋白酶MMP9和MMP的表達(dá)沒有影響。推測(cè),InnVit基因的抑制主要通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯而降低黑素細(xì)胞的存活和增殖能力。
　　 最后,研究了InnVit基因?qū)谒丶?xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹與酪氨酸酶的相關(guān)性。掃描電鏡觀察表明,siRNA抑制的黑

5、素細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有明顯的膨脹擴(kuò)大現(xiàn)象,其酪氨酸酶蛋白表達(dá)存在極顯著的增加。細(xì)胞免疫熒光共定位了酪氨酸酶和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記鈣網(wǎng)蛋白,發(fā)現(xiàn)抑制組細(xì)胞的酪氨酸酶大部分停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,表明其酪氨酸酶的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出發(fā)生阻滯,可見抑制InnVit基因表達(dá)影響了黑素細(xì)胞的酪氨酸酶從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出,導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹,從而導(dǎo)致細(xì)胞生物學(xué)活性異常。
　　 以上研究表明,本研究為InnVit基因影響黑素細(xì)胞的增殖和凋亡能力提供了有力的證據(jù),并揭示了白癜風(fēng)黑素細(xì)胞