EGCG對NB4細胞生物學功能的影響及作用機制的研究.pdf

1、第一部分EGCG通過活化p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡
　　目的：
　　本實驗主要探討EGCG是否能夠誘導NB4細胞凋亡及其可能的分子機制。
　　方法：
　　分別用不同濃度的EGCG處理NB4細胞，或預先用p38αMAPK的抑制劑PD169316處理NB4細胞半小時，再用相應濃度的EGCG處理NB4細胞。用CCK-8方法測定NB4細胞增殖狀況，用FITC-AnnexinV/PI雙染色法測定NB4細

2、胞凋亡狀況，用Western-Blot檢測p38αMAPK、p-p38αMAPK、Bcl-2和Bax蛋白質的表達水平。
　　結果：
　　隨著EGCG濃度的增加，CCK-8結果顯示EGCG依賴濃度梯度抑制NB4細胞增殖；流式細胞術發(fā)現(xiàn)EGCG能夠明顯促進NB4細胞凋亡；同時Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)p-p38αMAPK和Bax蛋白質表達水平升高，與EGCG濃度呈正相關，然而Bcl-2蛋白質表達水平隨EGCG濃度升高而降低

3、。在用p38αMAPK抑制劑處理后，CCK-8結果表明EGCG抑制細胞增殖的能力明顯減弱，同時流式細胞術顯示EGCG促進細胞凋亡的能力也減弱；Western-Blot結果顯示Bax蛋白質表達程度降低，但Bcl-2蛋白質表達程度無明顯變化。
　　結論：
　　EGCG可能通過活化p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡。
　　第二部分EGCG通過SHP-1調節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡
　

4、　目的：
　　本實驗主要觀察EGCG是否通過SHP-1調節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡。
　　方法：
　　分別用不同濃度的EGCG處理NB4細胞，或預先用SHP-1的抑制劑NSC87877處理NB4細胞半小時，再用相應濃度的EGCG處理NB4細胞。用CCK-8方法測定NB4細胞增殖狀況，用FITC-AnnexinV/PI雙染色法檢測NB4細胞凋亡狀況，用 Western-Blot檢測SHP-1、p3

5、8αMAPK、p-p38αMAPK和Bax蛋白質的表達水平。
　　結果：
　　Western-Blot檢測結果顯示EGCG能夠促進SHP-1蛋白質表達。預先用SHP-1抑制劑NSC87877處理后，SHP-1蛋白質的表達水平明顯降低；同時CCK-8結果顯示EGCG抑制細胞增殖的能力減弱，流式細胞術結果表明EGCG促進細胞凋亡的能力也減弱，Western-Blot檢測結果顯示p-p38αMAPK和Bax蛋白質表達水平隨之減少，