甲氧滴滴涕對(duì)人滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究.pdf

1、甲氧滴滴涕（methoxychlor MXC）是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的一種，化學(xué)名為二甲二苯三氯乙烷，作為滴滴涕的替代物廣泛使用，在土壤、河流、動(dòng)植物體內(nèi)、人體體液，甚至孕婦血液、胎盤、臍血、新生兒體內(nèi)都檢測到了甲氧滴滴涕。滋養(yǎng)細(xì)胞（cytotrophoblast CT）是構(gòu)成胎盤的主要細(xì)胞，包括絨毛外和絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞兩個(gè)亞型，其侵襲、免疫耐受、增殖分化、激素合成、物質(zhì)代謝等生物學(xué)功能是妊娠發(fā)生、維持的必要條件。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲氧滴滴涕可以造成

2、不孕、流產(chǎn)率增加，因此研究甲氧滴滴涕對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響具有重要意義。本研究為滋養(yǎng)細(xì)胞亞型的原代培養(yǎng)、鑒定后用侵襲小室、RT-PCR、Western-blot、放射免疫等方法研究甲氧滴滴涕對(duì)其侵襲能力、免疫耐受以及激素合成等生物學(xué)功能的影響。 研究目的：1 研究MXC 對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響；2 研究MXC 對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞免疫耐受功能的影響；3 研究MXC 對(duì)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞HCG、P 合成的影響。 研究方法

3、：1 用胰蛋白酶消化法得到單細(xì)胞懸液后流式細(xì)胞儀分選出滋養(yǎng)細(xì)胞亞型。光鏡，激光共聚焦，透射電鏡鑒定。2. 使用侵襲小室檢測空白對(duì)照組與1μmol/L 甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24h 后絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力變化。3.Western blot 檢測空白對(duì)照組與1μmol/L 甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24h 后絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-2、MMP-9、HLA-G 蛋白表達(dá)。4 RT-PCR 法檢測空白對(duì)照組與1μmol/L 甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24h

4、絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞HLA-G mRNA表達(dá)。5 用放射免疫法檢測空白對(duì)照組與1μmol/L 甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)48h 后HCG,、P 值。 結(jié)果：1 胰蛋白酶消化法加流式細(xì)胞儀分選出的細(xì)胞經(jīng)鑒定為絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞。2 甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組相比減少，侵襲能力下降（t=3.509，P<0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與空白對(duì)照組相比MMP-9、MMP-2

5、 蛋白表達(dá)下降。4 甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與空白對(duì)照組相比HLA-G蛋白和mRNA 表達(dá)下降。5 甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞合成HCG 與空白對(duì)照相組比減少（t=3.079，p<0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞合成P 與空白對(duì)照相組比減少（t=2.159，p<0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1 胰蛋白酶消化法加流式細(xì)胞儀可以分選出滋養(yǎng)細(xì)胞亞型。2 甲氧滴滴涕可以抑制絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力，其機(jī)制