甲氧滴滴涕染毒對(duì)孕鼠及其子代生殖毒性作用研究.pdf

1、近年來(lái)由于環(huán)境污染物對(duì)生殖和發(fā)育危害的后果突出，被認(rèn)為可能是造成不孕、流產(chǎn)、功能異常和畸形等因素之一。有研究表明動(dòng)物生殖和胚胎過(guò)程對(duì)環(huán)境毒物更加敏感。因此，環(huán)境污染對(duì)生殖和發(fā)育的危害成為生殖和發(fā)育毒物學(xué)中重要的研究?jī)?nèi)容。胚胎發(fā)育早期階段對(duì)環(huán)境污染物非常敏感，是由于在所有卵裂細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)雌激素受體貫穿于整個(gè)小鼠胚胎植入發(fā)育時(shí)期。因此，在孕早期體內(nèi)暴露外源性雌激素可改變小鼠和其他哺乳動(dòng)物發(fā)育進(jìn)程。研究小鼠妊娠早期體內(nèi)甲氧滴滴涕(methoxy

2、chlor， MXC)染毒對(duì)孕鼠生殖和生后子代發(fā)育的長(zhǎng)期毒性作用結(jié)果，探討了MXC染毒后胎盤(pán)雌激素受體α（Estrogen receptor α，Erα）、雌激素受體β（Estrogen receptor β，Erβ）表達(dá)及其作用機(jī)制。 本實(shí)驗(yàn)分為以下二部分： 一、甲氧滴滴涕染毒孕鼠模型的構(gòu)建及其對(duì)孕鼠的毒性作用 將交配成功的80只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，建立孕早期MXC染毒孕小鼠模型，于妊娠第0.5～7.5d

3、 每日皮下注射不同劑量MXC一次，以芝麻油溶劑為陰性對(duì)照組，雌二醇為陽(yáng)性對(duì)照組，MXC溶于芝麻油，于GD17.5稱(chēng)重并處死孕鼠，稱(chēng)重臟器重量，計(jì)算臟器系數(shù)，觀察各組孕鼠黃體和著床數(shù)等指標(biāo)，并觀察妊娠結(jié)局，并采用放射免疫法檢測(cè)孕鼠血清雌二醇(E2 )和孕酮(P)含量。采用光鏡及電鏡形態(tài)學(xué)變化胎盤(pán)組織。 結(jié)果表明：①隨著MXC染毒劑量的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，孕鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)減少，MXC 染毒劑量為166.67 mg/kg組在GD14.

4、5、GD17.5體質(zhì)量和體質(zhì)量增加值分別為(43.51±2.03)， (15.59±1.18)，(46.79±2.53)，(18.87± 0.55)；呈不同劑量間差異( P < 0.05)。②隨著MXC注射劑量的增加，母鼠子宮著床數(shù)減少，活胎數(shù)下降，不良妊娠結(jié)局(死胎、吸收胎數(shù)) 增多；③隨MXC染毒劑量增加，孕鼠血清中P水平升高，呈不同劑量間存在顯著性差異( P < 0.05)；MXC④染毒組胎盤(pán)海綿滋養(yǎng)層細(xì)胞特別是糖原細(xì)胞內(nèi)的糖原含

5、量與對(duì)照組相比顯著減少。 結(jié)論: ①M(fèi)XC可干擾孕小鼠的生殖功能和激素水平，孕鼠體質(zhì)量和肝臟相對(duì)體質(zhì)量隨劑量的增加有下降趨勢(shì)，而血清P含量降低，引起黃體數(shù)量和著床數(shù)減少，不良妊娠結(jié)局增加；MXC②可通過(guò)降低胎盤(pán)的糖原貯存．使其葡萄糖釋放量下降，進(jìn)而使胚胎發(fā)育過(guò)程中所必需的能量供應(yīng)不足，影響胎鼠正常發(fā)育；MXC③染毒作用最顯著的劑量為166.67mg/kg。 二、甲氧滴滴涕染毒對(duì)仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育及生殖功能的毒性作用 研

6、究建立孕早期MXC染毒孕小鼠模型，將孕小鼠隨機(jī)分為芝麻油對(duì)照組、5.0mgMXC組（166.67mg/kg）、1.0mg雌二醇組（0.033mg/kg）。妊娠并自然分娩，檢測(cè)胎仔數(shù)，出生時(shí)的性別比率，檢測(cè)兩性別子代的肛門(mén)與生殖器間距離（AGD），同時(shí)檢測(cè)雌性子代陰道開(kāi)放時(shí)間。采用放射免疫法檢測(cè)雄性子代血清黃體生成素(LH )、卵泡刺激素(FSH)和睪丸酮（T）含量。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)和免疫組織化學(xué)染色技術(shù)（SP)

7、檢測(cè)各組胎盤(pán)Erα、Erβ受體的表達(dá)。 結(jié)果表明：①暴露雌二醇或MXC并未改變出生時(shí)的性別比率，但是胎仔數(shù)減少；②PND21，在孕早期暴露雌二醇或MXC雄性仔鼠AGD比對(duì)照組短，這個(gè)變化在MXC處理組最明顯。在MXC暴露后雌性子代的AGD沒(méi)有受到影響。但是雌二醇處理組雌性小鼠的AGD比對(duì)照組記錄更長(zhǎng)；③孕早期暴露雌二醇或MXC也加速性成熟，表現(xiàn)為更多的雌性小鼠在斷奶時(shí)出現(xiàn)明顯早熟的陰道開(kāi)放現(xiàn)象；④MXC處理組的雄性小鼠可降低血L

8、H和FSH但是不改變睪丸酮水平。⑤MXC或E處理組胎盤(pán)組織Erα在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)均明顯高于芝麻油對(duì)照組，有顯著性差異( P＜0.05)、Erβ的表達(dá)無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：①研究顯示在孕早期暴露MXC或雌二醇造成在兩性子代斷乳后長(zhǎng)期的性發(fā)育改變；MXC②可阻滯兩性子代的發(fā)育和體重；③胎盤(pán)組織Erα、Erβ受體的蛋白水平與mRNA水平相一致，不存在蛋白翻譯的障礙；MXC作用機(jī)制可能與其胎盤(pán)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞Erα高表達(dá)有關(guān)。