產(chǎn)淀粉酶海洋酵母菌的篩選、鑒定及粗酶性質(zhì)的研究.pdf

1、本研究從自然環(huán)境中分離得到了數(shù)百株海洋酵母菌，通過使用含有曲利酚蘭的YPS平板可以產(chǎn)生透明圈的方法進(jìn)一步篩選得到八株能夠產(chǎn)淀粉酶的海洋酵母菌，分別為N13d，DMC， W13a，G7b， Ba，H，M和Wla。N13d來源于采集于南極的樣品，DMC來源于采集于中國(guó)福建泉州彎近海表層海水的沉積物中， W13a和G7b來源于采集于中國(guó)南海近海表層海水的沉積物中， Ba和M來源于采集于中國(guó)煙臺(tái)長(zhǎng)島近海海水的鲅魚腸道內(nèi)容物中，H來源于采集于中國(guó)

2、煙臺(tái)長(zhǎng)島近海海水的鯖魚腸道內(nèi)容物中，Wla來源于采集于中國(guó)煙臺(tái)長(zhǎng)島近海表層海水的海藻中。 在pH 3.0-pH 10.0標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定了pH對(duì)于菌株所產(chǎn)粗酶活性的影響；在反應(yīng)溫度范圍為20-80℃，菌株DMC， W13a，G7b， Ba，H，M和Wla所產(chǎn)粗酶的最適pH為5.0，最適溫度為50℃；菌株N13d所產(chǎn)粗酶的最適pH為4.5，最適溫度為60℃。在上述最適pH和溫度條件下，28℃搖床轉(zhuǎn)速為170 r/min，振蕩培養(yǎng)

3、48 h時(shí)，八株菌發(fā)酵液中淀粉酶的比活性分別為：菌株Ba96.0 U/mg，菌株DMC 80.9 U/mg，菌株H 256.0 U/mg，菌株M 314.5 U/mg，菌株Wla 189.0 U/mg，菌株W13a 707.0 U/mg，菌株G7b 984.0 U/mg，菌株N13d1282.0 U/mg。 酵母菌落的外觀形態(tài)、透明度、與培養(yǎng)基的結(jié)合程度、顏色和菌落邊緣；細(xì)胞出芽方式和位置、形態(tài)特征；是否形成假菌絲及假菌絲的形態(tài)

4、等，是酵母菌鑒定的重要形態(tài)指標(biāo)。將八株菌的菌落顏色、大小和細(xì)胞形態(tài)等特征與參考文獻(xiàn)中的標(biāo)準(zhǔn)圖片按照最大相似性原則進(jìn)行對(duì)比，對(duì)菌株進(jìn)行初步鑒定；酵母菌生理生化特性鑒定指標(biāo)有碳源發(fā)酵測(cè)試、碳源同化測(cè)試、氮源同化測(cè)試、肌醇同化測(cè)試、類淀粉化合物形成測(cè)定、在無維生素培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)試驗(yàn)、耐高滲透壓的測(cè)試及在37℃培養(yǎng)條件下作生長(zhǎng)溫度測(cè)試等，通過對(duì)八株菌分別進(jìn)行以上指標(biāo)測(cè)試對(duì)它們做進(jìn)一步鑒定；提取各菌株基因組DNA，使用酵母菌18S rDNA通用引

5、物擴(kuò)增目標(biāo)產(chǎn)物后直接測(cè)序，將序列提交到Genbank數(shù)據(jù)庫，登陸號(hào)分別為菌株Ba EF141325，菌株DMC EF141326，菌株H EF144130，菌株M EF141323，菌株Wla EFl41322，菌株W13a EFl41324，菌株G7b DQ437077，菌株N13d DQ242509。將八株海洋酵母菌的18S rDNA序列分別與Genbank數(shù)據(jù)庫中其它酵母菌的18S rDNA序列進(jìn)行比對(duì)，并進(jìn)行進(jìn)化樹分析，對(duì)菌株進(jìn)

6、行分子生物學(xué)鑒定。結(jié)合傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)、生理生化特性鑒定結(jié)果與分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，最后確定菌株Ba，H，M和Wla是解脂耶羅威亞酵母(Yarrowia lipolytica)，菌株DMC是平滑假絲酵母(Candida parapsilosis)，菌株W13a，G7b和N13d是普魯蘭短梗霉(Aureobasidium pullulans)。 本研究對(duì)這八株海洋酵母菌所產(chǎn)的淀粉酶粗酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究，證實(shí)所產(chǎn)淀粉酶可以降解生淀粉，薄層

7、層析結(jié)果表明，水解產(chǎn)物中只有葡萄糖被釋放出來，說明八株海洋酵母菌產(chǎn)生的淀粉酶為葡萄糖淀粉酶，可以作用于淀粉分子的α-1，4糖苷鍵和α-1，6糖苷鍵。 目前在陸地酵母菌中發(fā)現(xiàn)Arxula adeninivorans, Lipomyces,Saccharomycopsis， Schwanniomyces,Candida japonica,Cryptococcus sp,Corticium rolfsii和 Filobasidium