天麻蛋白對動物細(xì)胞生長的影響及分子機理.pdf

1、本實驗旨在研究天麻蛋白(GRP)在腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞中的作用，并進一步探討誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、促進造血細(xì)胞增殖的分子機理。實驗用磁性納米粒子吸附法純化水提物中的蛋白成分，通過活細(xì)胞計數(shù)法確定以連有納米粒子的GRP為實驗藥物。MTT法得到藥物對細(xì)胞的最佳作用濃度，應(yīng)用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀DNA凝膠電泳儀檢測GRP對腫瘤細(xì)胞的生長抑制，通過觀察DNA Ladder的發(fā)生來觀察細(xì)胞凋亡，并用RT-PCR檢測到與凋亡有關(guān)的基因p53的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)

2、GRP對小鼠MNC擴增有作用，從而將GRP運用到人臍帶血MNC的擴增分化上，用集落形成法分析藥物與擴增的線性關(guān)系，基質(zhì)層、基質(zhì)上清對 CFU-GM的影響，用RT-PCR技術(shù)檢測基質(zhì)層細(xì)胞生長因子基因的擴增。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1、磁性納米粒子分離到GRP蛋白較未純化藥物有更好的凋亡誘導(dǎo)作用，且磁性納米粒子本身并不具細(xì)胞毒害作用；2、GRP抑制腫瘤細(xì)胞生長，隨藥物劑量加大，細(xì)胞凋亡數(shù)上升，其半數(shù)抑制濃度為571.5μg/ml，凋亡特征明顯，其原因可