9型腺相關(guān)病毒介導(dǎo)細(xì)胞周期素A2治療心肌梗死的實驗研究.pdf

1、目的：探討9型腺相關(guān)病毒介導(dǎo)細(xì)胞周期素A2因子促進梗死后心肌自身修復(fù)和重啟細(xì)胞周期進程的可行性。
　　方法：80只小鼠隨機分為Sham組（n=20）、rAAV9-eGFP組（n=30）和rAAV9-Cyclin-A2組（n=30）。病毒滴度為2×1011vg/ml，稀釋于生理鹽水中，每只小鼠注射200ul病毒稀釋液，通過尾靜脈注射至小鼠體循環(huán)，Sham組僅通過尾靜脈注射等量生理鹽水。注射一周后建立心肌梗死模型，觀察時間為3周。心臟

2、超聲檢查評價心功能情況。Western blot檢測目的蛋白Cyclin-A2及增殖相關(guān)蛋白PCNA、H3P的表達。免疫組化、免疫熒光檢測相關(guān)因子在心肌中的定位和表達。利用Masson三染檢測膠原容積以評價心室重構(gòu)情況。
　　結(jié)果：Western blot顯示，rAAV9-Cyclin-A2組細(xì)胞周期素A2因子在注射后第2周可獲得穩(wěn)定表達并可至少持續(xù)至第4周。相比于空白組和rAAV9-eGFP組差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01

3、）。增殖細(xì)胞核抗原和磷酸組蛋白H3在rAAV9-Cyclin-A2組明顯高于其余兩組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。心臟干細(xì)胞標(biāo)志物 C-kit和Connexin-43在rAAV9-Cyclin-A2組表達明顯升高，相比于空病毒組差異明顯。免疫組化和免疫熒光顯示細(xì)胞周期素A2因子主要定位于細(xì)胞核中。Masson染色顯示 rAAV9-Cyclin-A2組膠原含量少于空白組和rAAV9-eGFP組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.029