RYR2基因G1885E,G1886S位點(diǎn)多態(tài)性與不明原因心臟性猝死的相關(guān)性探索.pdf

1、【研究背景】鈣離子在維持心臟正常節(jié)律和興奮-收縮耦聯(lián)中發(fā)揮重要作用。RYR2基因編碼心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)Ca2+釋放通道-雷諾定受體2(Ryanodinereceptor2,RyR2),該基因的突變引起RyR2通道舒張期肌漿網(wǎng)Ca2+泄露增加,引發(fā)心肌細(xì)胞Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡,從而導(dǎo)致致死性心律失常。大量研究表明致心律失常性右心室心肌病(Arrhythmogenicrightventricularcardiomyopathy,ARVC)和兒茶酚胺

2、性多形性室性心動(dòng)過速(Catecholaminergicpolymorphicventriculartachycardia,CPVT)與RYR2基因變異存在相關(guān)性,而CPVT與ARVC患者平?？蔁o明顯臨床癥狀和體征,約50％患者以暈厥和猝死為首發(fā)癥狀,易引起糾紛而需進(jìn)行法醫(yī)病理學(xué)尸體解剖檢查,但多數(shù)案例心臟未檢見明顯形態(tài)學(xué)異常,此類案例常被稱為不明原因心臟性猝死(Suddenunexplainedcaidiacdeath,SUD),是困

3、擾法醫(yī)病理學(xué)研究的難點(diǎn)之一。因此尋找一種分子病理學(xué)診斷方法,以確定上述患者的死因,對法醫(yī)病理學(xué)領(lǐng)域SUD的診斷及臨床上該類猝死的預(yù)防將具有重要意義。
　　【目的】通過對RyR2的功能狀態(tài)具有重要調(diào)節(jié)作用的RYR2基因2個(gè)位點(diǎn)(G1885E、G1886S)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)進(jìn)行檢測,分析2個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性及其與SUD之間的關(guān)系,以期在分子遺傳學(xué)水平對法醫(yī)病理學(xué)SUD案例的死因診斷提供依據(jù),為臨床SUD的預(yù)防提供參考。
　　

4、【方法】嚴(yán)格按照篩選標(biāo)準(zhǔn)選取湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)鑒定中心2005-2011年間不明原因心臟性猝死案例(34例)為實(shí)驗(yàn)組,本中心親子鑒定室無親緣關(guān)系的健康人群(78例)為對照組;分別利用石蠟包埋組織基因組DNA提取試劑盒和全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA;選擇RYR2基因2個(gè)位點(diǎn)(G1885E、G1886S)為目標(biāo)觀察位點(diǎn),使用primerprimer5.0軟件設(shè)計(jì)包含上述2個(gè)位點(diǎn)在內(nèi)的特異性引物;PCR擴(kuò)增目的基因片段(約269bp

5、),純化后測序;運(yùn)用NCBI-BLAST軟件與數(shù)據(jù)庫中已登陸的序列對上述位點(diǎn)進(jìn)行同源性分析并提取每個(gè)位點(diǎn)的基因型;運(yùn)用軟件SPSS17.0和Hard-WeinbergV2.0平衡檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
　　【結(jié)果】(1)對照組78例樣本中,73例測序成功,5例信號(hào)弱(weaksignals);實(shí)驗(yàn)組34例樣本中,29例測序成功,5例信號(hào)弱。(2)實(shí)驗(yàn)組RYR2基因G1886S位點(diǎn)測序結(jié)果為:GG基因型89.66%(24/29),A

6、G基因型13.79%(4/29),AA基因型3.45%(1/29),其中野生型G等位基因頻率89.66%,突變型A等位基因頻率10.34%。對照組RyR2基因G1886S位點(diǎn)測序結(jié)果為:GG基因型98.63%(72/73),AG基因型1.37%(1/73),AA基因型0%(0/73),其中野生型G等位基因頻率99.32%,突變型A等位基因頻率0.68%。兩組之間基因型(GG、AG、AA)的分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),等位基因頻率

7、(G、A)分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),研究結(jié)果顯示RyR2基因G1886S位點(diǎn)變異與SUD之間存在相關(guān)性。(3)實(shí)驗(yàn)組RyR2基因G1885E位點(diǎn)測序結(jié)果為:GG基因型100%(29/29),G等位基因頻率100%。對照組RyR2基因G1885E位點(diǎn)測序結(jié)果為:GG基因型100%(73/73),野生型G等位基因頻率100%。兩組之間基因型及等位基因頻率分布無差異及統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　【結(jié)論】(1)RYR2基因G1886S位點(diǎn)