Nephrin基因G349A多態(tài)性與2型糖尿病腎病的相關(guān)性研究.pdf

1、糖尿病腎病(DiabeticnephropathyDN)是目前導(dǎo)致終末期腎病的主要原因之一，臨床上以蛋白尿和腎功能損害為特征。目前的研究認(rèn)為DN發(fā)病機(jī)理除與血流動(dòng)力學(xué)異常，高血糖相關(guān)的代謝異常有關(guān)外，尚可能具有某些潛在的遺傳素質(zhì)，與某些基因的突變或多態(tài)性變化有關(guān)。 Nephrin是連接相鄰腎小球臟層上皮細(xì)胞突起間的主要結(jié)構(gòu)蛋白，形成阻止蛋白等大分子濾過的最后屏障。人類的nephrin編碼基因NPHS1定位于19q13.1，全長約

2、26Kb，含29個(gè)外顯子。目前已知nephrin基因至少存在60個(gè)突變位點(diǎn)，其中絕大部分突變與先天性腎病綜合癥(CNS)發(fā)病有關(guān)。而在正常健康對(duì)照人群中亦發(fā)現(xiàn)其編碼區(qū)存在基因序列差異，其中G349A(E117K)等單核苷酸改變可引起Nephrin氨基酸序列改變?；趎ephrin結(jié)構(gòu)改變可引起以大量蛋白尿?yàn)橹饕憩F(xiàn)的諸多腎臟疾病，而G349A基因多態(tài)性可通過改變nephrin氨基酸序列，從而有可能參與DN的發(fā)生，因此本研究擬通過檢測(cè)NP

3、HS1-G349A基因多態(tài)性，探討其與2型糖尿病腎病易感性關(guān)系。 方法利用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片斷長度多態(tài)性技術(shù)(PolymeraseChainReactionRestrictionFragmentLengthPolymorphism，PCR-RFLP)檢測(cè)NPHS1-G349A(Glu/Lys)多態(tài)性共225例。其中正常對(duì)照84例，男性49例，女性35例，平均年齡50.4±11.7歲；2型糖尿病非蛋白尿患者74例，男性27例，

4、女性47例，平均年齡62.2±10.7歲，病程11.6±4.9(5.0～30)年；2型糖尿病蛋白尿患者67例，其中微量白蛋白尿50例，大量白蛋白尿17例，男性38例，女性29例，平均年齡63.8±10.5歲，病程11.7±3.8(5.0～20)年。用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)樣本的群體代表性，比較各組基因型頻率及等位基因頻率，采用χ2檢驗(yàn)分析其分布是否有顯著性差異。采用方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)比較2型糖尿病患者不同基因型24小時(shí)尿

5、白蛋白、內(nèi)生肌酐清除率等臨床指標(biāo)水平。指標(biāo)間關(guān)系判定采用多重線性回歸分析。 結(jié)果1.正常對(duì)照和2型糖尿病患者樣本均符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)，提示樣本具有群體代表性。2.浙江地區(qū)漢族正常人NPHS1-G349A多態(tài)性AA、GA、GG三種基因型頻率分別為40.5％、44.0％、15.5％，A等位基因頻率為62.5％。正常對(duì)照不同性別間基因型(χ2=0.31，p=0.86)和等位基因頻率(χ2=0.32，p

6、=0.57)分布無顯著性差異。T2DM患者AA、GA、GG三種基因型頻率分別為39.0％、48.2％、12.8％，A等位基因頻率分別為63.1％。正常對(duì)照組與T2DM組三種基因型的分布無顯著性差異(χ2=1.123，p=0.891)，等位基因頻率的分布無顯著性差異(χ2=0.959，p=0.619)。 3.正常對(duì)照組、2型糖尿病非蛋白尿組和2型糖尿病蛋白尿組中基因型的分布無顯著性差異(χ2=1.049，p=0.902)，等位基因

7、頻率的分布亦沒有顯著性差異(χ2=0.423，p=0.809)；不同性別上述三組間基因型分布無顯著性差異(男性組χ2=4.339p=0.362，女性組χ2=1.178p=0.882)，等位基因頻率無顯著性差異(男性組χ2=0.880p=0.644，女性組χ2=0.134p=0.935)。 4.病程≤10年和病程＞10年的T2DM蛋白尿組患者三種基因型的分布未發(fā)現(xiàn)有顯著差異(χ2=1.55，p=0.46)，等位基因頻率無顯著差異(

8、χ2=0.50，p=0.48)。5.T2DM正常蛋白尿組(AER＜30mg/24h)、微量蛋白尿組(30mg/24h≤AER＜300mg/24h)和大量蛋白尿組(AER≥300mg/24h)三組間基因型分布和等位基因頻率無顯著差異(基因型χ2=1.123，p=0.891；等位基因χ2=0.959，p=0.619)。 6.GG基因型組患者內(nèi)生肌酐清除率[Ccr(ml/min·1.73m2)]較AA基因型組患者低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

9、68.9±39.5VS93.4±33.3p=0.016)。 7.多重回歸分析結(jié)果顯示：年齡、性別、AER和GG基因型(B=-18.64，p=0.045)是T2DM腎功能減退的危險(xiǎn)因素。 結(jié)論1.浙江地區(qū)漢族人群存在NPHS1-G349A單核苷酸多態(tài)性。 2.NPHS1-G349A基因多態(tài)性可能不是T2DM的易感基因。 3.NPHS1-G349A基因多態(tài)性可能與T2DM腎病遺傳易感性無關(guān)。 4.NP