檢疫性害蟲(chóng)——棗實(shí)蠅分子生物學(xué)快速鑒定技術(shù)研究.pdf

1、棗實(shí)蠅(Carpomya vesuviana Costa)是2007年首次在新疆吐魯番地區(qū)發(fā)現(xiàn)的重大檢疫性害蟲(chóng)，系在新疆乃至全國(guó)棗產(chǎn)業(yè)上有著重要經(jīng)濟(jì)意義的害蟲(chóng)。棗實(shí)蠅的鑒定是國(guó)內(nèi)外棗貿(mào)易中最突出的技術(shù)問(wèn)題之一，建立檢疫性棗實(shí)蠅特別是未成熟蟲(chóng)態(tài)快速可靠的鑒定方法在植物檢疫上有重要意義。
　　本研究以國(guó)內(nèi)普遍關(guān)注的檢疫性害蟲(chóng)棗實(shí)蠅為研究對(duì)象，測(cè)定了棗實(shí)蠅的mtDNA COⅠ和Cytb基因部分序列，將獲得的基因片段與已公開(kāi)報(bào)道的其它同源

2、序列進(jìn)行比較分析，設(shè)計(jì)了棗實(shí)蠅15對(duì)引物基礎(chǔ)上，應(yīng)用種特異引物PCR(SS-PCR)和SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，篩選出了棗實(shí)蠅的特異性引物，在此基礎(chǔ)上研發(fā)了檢疫性棗實(shí)蠅的分子生物學(xué)快速鑒定技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.首次提取了棗實(shí)蠅基因組DNA，分別測(cè)定棗實(shí)蠅mtDNACOⅠ兩段不同的基因序列和cytb部分基因序列;首次將吐魯番棗實(shí)蠅序列錄入GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，序列號(hào)分為HQ687210,JX515609和J

3、X101439。
　　2.首次以目標(biāo)棗實(shí)蠅線粒體DNA(mtDNA)中COⅠ基因序列(GenBank序列號(hào):HQ687210)為目標(biāo)序列，借助Mega4軟件（DNASTAR公司，美國(guó)）中CLUSTAL方法，與已知其它種類的實(shí)蠅的COⅠ基因序列（包括本研究和其它公開(kāi)報(bào)道的序列）進(jìn)行比較分析，通過(guò)篩選獲得能特異鑒定棗實(shí)蠅的引物1對(duì)，從而建立了棗實(shí)蠅特異引物PCR鑒定技術(shù)。
　　3.本研究應(yīng)用PCR—RFLP技術(shù)，將新入侵的檢疫性

4、害蟲(chóng)棗實(shí)蠅比對(duì)我國(guó)口岸截獲頻率較高的5種檢疫性實(shí)蠅進(jìn)行快速鑒定，其目的在于尋找出適用于新入侵檢疫性害蟲(chóng)棗實(shí)蠅快速而又準(zhǔn)確的鑒定技術(shù)。
　　4.利用自行設(shè)計(jì)的特異引物，應(yīng)用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，建立了SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR(SG-PCR)快速鑒定棗實(shí)蠅的方法，SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR產(chǎn)物特異性通過(guò)溶解曲線分析來(lái)確認(rèn)。
　　5.首次克隆了檢疫性害蟲(chóng)棗實(shí)不同地理種群mtDNA COⅠ基因從M