異丙托溴銨對變應性鼻炎小鼠鼻黏膜Th1、Th2、Th17及Treg細胞的影響.pdf

1、目的:
　　異丙托溴銨作為抗膽堿藥的一種，能夠抑制鼻腔內的副交感神經(jīng)纖維，臨床上，可用來控制變應性鼻炎的鼻部癥狀的發(fā)作。關于異丙托溴銨在改善變應性鼻炎癥狀同時，能否對機體細胞和體液免疫產(chǎn)生影響，這方面國內外鮮有報道。本實驗通過構建AR動物模型，探討抗膽堿藥對AR動物模型鼻腔局部免疫環(huán)境的影響，為抗膽堿藥的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　選用32只5-6周齡BALB/c雌性小鼠，隨機分為:16只用于變應性鼻炎模型

2、的建立，另16只用于對照。致敏方法:采用經(jīng)典的OVA致敏法構建變應性鼻炎模型，分別在第0天、第5天通過腹腔注射予以基礎致敏，再從第12天起用OVA進行連續(xù)7天的滴鼻激發(fā)，之后再次使用OVA予以間天長期緩慢滴鼻刺激10周，其余各組使用生理鹽水代替。整個建模過程長達4月余，以模擬變應性鼻炎發(fā)病的慢性過程。11只小鼠建模成功后，隨機分為模型組（5只）和模型治療組（6只），對照組也分為對照空白組（8只），對照治療組（8只）。模型治療組和對照治療

3、組小鼠即開始予以3mg/ml異丙托溴銨20μl每側鼻腔滴鼻治療，持續(xù)給藥4周，同時模型組與對照組用等量生理鹽水代替異丙托溴銨滴鼻，在治療期間，模型治療組和模型組均繼續(xù)予以3％OVA溶液10μl每側鼻腔間天滴鼻刺激。治療結束后，取小鼠鼻粘膜，通過HE染色進行組織形態(tài)學觀察對比。由于小鼠死亡等原因，最后用于分析的樣本數(shù)分別為對照組5只，模型組3只，模型治療組5只，對照治療組5只。采用Westernblot法檢測各組小鼠IL-4、IL-17、

4、IFN-γ、Foxp3蛋白含量，同時還用RT-PCR法檢測IL-4、IL-17 mRNA含量。
　　結果:
　　治療前，模型治療組、模型組行為評分均達到或超過變應性鼻炎模型評分標準，建模成功。治療后，模型治療組行為評分低于模型組(P＜0.05)。Western blot結果顯示，與對照組比較，在變應性鼻炎小鼠模型中，鼻粘膜IL-4及IL-17的表達顯著升高(P＜0.05)，IFN-γ和Foxp3蛋白表達也略有升高，但無統(tǒng)計學

5、意義(P＞0.05)。變應性鼻炎模型經(jīng)異丙托溴銨局部治療后，IL-4表達有顯著下降(P＜0.05)，而Foxp3表達有升高趨勢，但沒有統(tǒng)計學差異(p＞0.05)，而IFN-γ及IL-17細胞因子表達沒有明顯變化(p＞0.05)。對照組經(jīng)異丙托溴銨治療后，鼻粘膜局部的IL-4、IL-17、Foxp3的表達有升高趨勢。RT-PCR結果顯示，與對照組比較，變應性鼻炎小鼠的IL-4及IL-17的mRNA表達有升高(p＜0.05)，經(jīng)異丙托溴銨治

6、療后，IL-4表達有下降趨勢(p＜0.05)，與Western blot結果一致;而IL-17表達也有顯著下降(p＜0.05)。
　　結論:
　　1）通過蛋白質雜交及定量RT-PCR分析顯示，變應性鼻炎小鼠模型的鼻粘膜中存在Th2細胞優(yōu)勢為主的免疫失衡，同時IL-17表達也顯著升高。
　　2）異丙托溴銨在改善變應性鼻炎癥狀的同時，能降低鼻粘膜中Th2細胞分泌的細胞因子IL-4，并增強Treg細胞的Foxp3的產(chǎn)生，但沒