Vip3Aa11蛋白對(duì)玉米鱗翅目害蟲殺蟲活性及對(duì)腰帶長(zhǎng)體繭蜂安全性研究.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt）是目前應(yīng)用最為廣泛的殺蟲生防微生物，可以產(chǎn)生多種殺蟲蛋白。其中，營(yíng)養(yǎng)期殺蟲蛋白(Vegetative insecticidal proteins，VIPs)是Bt對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期開始分泌、穩(wěn)定前期達(dá)到最高峰的新型分泌殺蟲蛋白，對(duì)多種農(nóng)林害蟲特別是鱗翅目害蟲具有廣泛的殺蟲活性。本論文針對(duì)這一殺蟲蛋白，選取了亞洲玉米螟、桃蛀螟、棉鈴蟲、黏蟲和雙委夜蛾為試蟲，測(cè)定該蛋白對(duì)這5

2、種玉米主要害蟲的致死毒力及體重抑制活性;并測(cè)定了亞洲玉米螟取食毒素蛋白后體內(nèi)血淋巴中毒素含量及試蟲中腸消化酶活性的變化趨勢(shì);最后針對(duì)該毒素對(duì)亞洲玉米螟寄生性天敵——腰帶長(zhǎng)體繭蜂的安全風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.實(shí)驗(yàn)通過飼料混合法測(cè)定了Vip3Aa11蛋白對(duì)亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis、桃蛀螟Conogethes punctiferalis、棉鈴蟲Helicovorpa armigera和黏蟲Myth

3、imna separata的LC50和EC50，浸液法測(cè)定了雙委夜蛾Athetis dissimilis的平均死亡率和平均體重。結(jié)果表明Vip3Aa11對(duì)桃蛀螟、棉鈴蟲和黏蟲有良好的殺蟲活性，LC50分別為0.64μg/g、1.93μg/g和0.60μg/g，EC50分別為0.77μg/g、0.37μg/g和0.43μg/g;Vip3Aa11對(duì)亞洲玉米螟的殺蟲活性較低，但有一定的體重抑制作用，LC50和EC50分別為99.1μg/g和1

4、9.36μg/g;Vip3Aa11對(duì)雙委夜蛾無顯著殺蟲活性。
　　2.通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)的方法測(cè)定了亞洲玉米螟幼蟲取食Vip3Aa11蛋白后，該蛋白在幼蟲體內(nèi)血淋巴中含量的變化趨勢(shì)。結(jié)果顯示，亞洲玉米螟幼蟲血淋巴中Vip3Aa11蛋白含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。亞洲玉米螟幼蟲血淋巴中Vip3Aa11蛋白含量在停止取食后6h之內(nèi)下降最為迅速，從89.69μg/g下降至34.84μg/g，停止取食36h時(shí)為3.17

5、μg/g，48h以后下降至1μg/g以下。這說明亞洲玉米螟對(duì)Vip3Aa11蛋白具有降解代謝作用。
　　3.進(jìn)一步測(cè)定了亞洲玉米螟幼蟲取食Vip3Aa11蛋白后，中腸胰蛋白酶活力和類胰凝乳蛋白酶活力的變化。本研究表明取食含有Vip3Aa11蛋白人工飼料的亞洲玉米螟幼蟲中腸胰蛋白酶活性和類胰凝乳蛋白酶活性隨取食時(shí)間的增加呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。亞洲玉米螟幼蟲中腸胰蛋白酶活性和類胰凝乳蛋白酶活性在36h時(shí)顯著高于對(duì)照組，說明亞洲玉米螟

6、幼蟲中腸胰蛋白酶和類胰凝乳蛋白酶對(duì)降解體內(nèi)Vip3Aa11蛋白具有重要作用。
　　4.針對(duì)Vip3Aa11蛋白對(duì)亞洲玉米螟寄生性天敵——腰帶長(zhǎng)體繭蜂的安全風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行研究。間接安全風(fēng)險(xiǎn)試驗(yàn)結(jié)果顯示:被腰帶長(zhǎng)體繭蜂寄生后的亞洲玉米螟幼蟲取食含有Vip3Aa11蛋白的人工飼料，其死亡率顯著升高，繭重和單頭出蜂量顯著下降，而寄生率及成蟲壽命沒有受到不利影響。直接安全風(fēng)險(xiǎn)試驗(yàn)結(jié)果顯示:腰帶長(zhǎng)體繭蜂取食含有Vip3Aa11蛋白的蜂蜜水對(duì)腰帶長(zhǎng)體