A20基因修飾的血管內(nèi)支架的研制及其防治豬頸動(dòng)脈再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文A20基因修飾的血管內(nèi)支架的研制及其防治豬頸動(dòng)脈再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究姓名：周振華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：李露斯20090501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)基因EPCs種植支架后經(jīng)流動(dòng)腔，激光共聚焦顯微鏡及電鏡觀察檢測(cè)細(xì)胞改變。3A20基因修飾血管內(nèi)支架防治再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究A20基因修飾支架的加工；活體植入豬的頸動(dòng)脈，對(duì)照組pcDNA31voidvectors為A組，A20修飾的支架為B組；A20表達(dá)的

2、檢測(cè)；通過(guò)如下指標(biāo)評(píng)判兩組之間的效果：頸動(dòng)脈造影；病理組織形態(tài)分析及病理學(xué)積分；cD31及PcNA免疫組化檢測(cè)；凋亡檢測(cè)；電鏡檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞。結(jié)果1EPCs培養(yǎng)鑒定11細(xì)胞體外培養(yǎng)2—3d后，細(xì)胞呈短梭形、多角形等多種形態(tài)，有少量細(xì)胞突起。培養(yǎng)7—9d，出現(xiàn)鵝卵石樣細(xì)胞組成的細(xì)胞集落，形成明顯克隆。繼續(xù)培養(yǎng)3—4d集落逐漸散開(kāi)。重懸后繼續(xù)培養(yǎng)仁5d細(xì)胞逐漸融合，呈現(xiàn)典型的“鋪路石’’樣。12EPCs超微結(jié)構(gòu)：透射電鏡觀察結(jié)果示

3、EPCs內(nèi)可見(jiàn)特征性的WP小體(Weibel一palade小體)，同時(shí)可見(jiàn)大量吞噬小泡、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器。13培養(yǎng)EPCs免疫化學(xué)染色：早期CD34、CDl33、KDR表達(dá)呈陽(yáng)性，三周后細(xì)胞CD34、砌)R、vWF表達(dá)呈陽(yáng)性，但CDl33表達(dá)呈陰性。14生物學(xué)功能檢測(cè)：能攝取DiI—acLDL并能結(jié)合FITC—UEAI，雙染色陽(yáng)性細(xì)胞，被認(rèn)為是正在分化的EPCs，2轉(zhuǎn)基因內(nèi)皮祖細(xì)胞種植支架的研制21A20成功轉(zhuǎn)染了EPCs，經(jīng)免疫

4、組化和W色stemblot檢測(cè)陽(yáng)性。22支架上面細(xì)胞生長(zhǎng)狀況培養(yǎng)七天后的支架經(jīng)激光共聚焦顯微鏡觀察：1)AB兩組支架上面細(xì)胞均能完全覆蓋支架，實(shí)現(xiàn)支架的內(nèi)皮化，且能吞噬LDL，顯示生物學(xué)功能良好。2)而經(jīng)過(guò)流動(dòng)腔后AB兩組支架上面細(xì)胞有所脫落，A組細(xì)胞數(shù)量明顯減少，呈散在分布，沒(méi)有覆蓋支架表面；B組支架上面細(xì)胞雖有所脫落，但能基本覆蓋支架，兩種方法計(jì)數(shù)提示B組明顯多于A組支架上面細(xì)胞數(shù)量(PO01)。3A20基因修飾血管內(nèi)支架防治再狹窄