玉米素核苷單抗制備及免疫測(cè)定中加樣量與IC-,50-關(guān)系研究.pdf

1、本研究利用高碘酸鈉氧化法將玉米素核苷與牛血清白蛋白耦聯(lián)，制備ZR-BSA免疫Balb/c小鼠，取脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)篩選和克隆，得到一株穩(wěn)定分泌玉米素核苷單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為4E<,7>D<,3>G<,4>。雜交瘤細(xì)胞株4E<,7>D<,3>G<,4>傳代培養(yǎng)及凍存復(fù)蘇分泌抗體穩(wěn)定。 1.體內(nèi)誘生腹水法制備單克隆抗體，并進(jìn)行單克隆抗體性質(zhì)鑒定。應(yīng)用鼠抗體亞型檢測(cè)試劑盒對(duì)4E<,7>D<,3>G<,4

2、>抗體進(jìn)行鑒定，4E<,7>D<,3>G<,4>抗體屬于IgGl亞類(lèi)，輕鏈屬于κ型。用間接酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定腹水抗體效價(jià)為2～4×10<'4>，抗體與玉米素交叉反應(yīng)為50％，與異戊烯基腺嘌呤及異戊腺嘌呤核苷的交叉反應(yīng)均小于5％。 2.應(yīng)用所篩選的單克隆抗體建立了玉米素核苷的間接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA方法，該方法對(duì)玉米素核苷的IC<,50>為16.7ng/mL，檢測(cè)范圍為2.3～129.5ng/mL。樣品稀釋液和大豆樣本中的添加回收率

3、分別為97.4％～108.0％和104.5％～118.0％。 3.首次從理論上研究了加樣量與IC<,50>值關(guān)系。如果待測(cè)物占反應(yīng)體系50％的IC<,50>值為IC<,50>(50％)，則待測(cè)物體積占反應(yīng)體系n％時(shí)，IC<,50>值的理論公式為IC<,50>(n％)=(50％/n％)×IC<,50>(50％)。 4.以4E<,7>D<,3>G<,4>單抗和酶標(biāo)玉米素核苷為基礎(chǔ)，建立了直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，剛不同的樣品加