去甲腎上腺素與鋁免疫毒性的關(guān)系.pdf

1、在體實驗以Wistar大鼠為實驗動物,將60只體重為110g～120g的大鼠隨機均分為4組,飲水染鋁,三氯化鋁(AlCl3)水溶液的濃度分別為0(對照組,C組)、64.18mg/kg(低劑量組,L組)、128.36mg/kg(中劑量組,M組)、256.72mg/kg(高劑量組,H組),連續(xù)染鋁120d,復制亞慢性鋁中毒大鼠模型,通過對染鋁大鼠脾臟淋巴細胞增殖、免疫細胞因子、T淋巴細胞亞群、血清及下丘腦中去甲腎上腺素(NE)水平,血清中促

2、腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)酮(Cort)含量,脾臟淋巴細胞內(nèi)cAMP含量,脾臟淋巴細胞膜上β2-AR密度及β2-ARmRNA表達水平的觀測,探討染鋁對大鼠免疫狀態(tài)和NE水平的影響,找出NE水平與染鋁大鼠免疫狀態(tài)的關(guān)系:
　　 體外實驗以培養(yǎng)1月齡的大鼠脾臟淋巴細胞為研究對象,在培養(yǎng)液中分別添加0(對照組,W-C組)、1/20IC50(低劑量組,W-L組)、1/10IC50(中劑量組,W-

3、M組)、1/5IC50(高劑量組,W-H組)的.AlCl3,通過對脾臟淋巴細胞增殖、免疫細胞因子、T淋巴細胞亞群的檢測,確定1/10IC50鋁濃度可致淋巴細胞免疫抑制。以添加此染鋁濃度的淋巴細胞為研究對象,分別添加0(對照組,N-C組)、10-10(低劑量組,N-L組)、10-9(中劑量組,N-M組)、10-8(高劑量組,N-H組)mol/L的NE,通過對大鼠脾臟淋巴細胞增殖、免疫細胞因子、T淋巴細胞亞群,脾臟淋巴細胞內(nèi)cAMP含量,脾

4、臟淋巴細胞膜上β2-AR密度及β2-ARmRNA表達水平的檢測,探討NE對鋁免疫毒性的調(diào)節(jié)作用。實驗結(jié)果如下:
　　 體內(nèi)實驗結(jié)果表明:
　　 1.亞慢性鋁中毒大鼠血清和脾臟中鋁含量均顯著或極顯著高于C組;T、B淋巴細胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞表達率和CD4+/CD8+的比值以及脾臟組織中IL-2和TNF-α含量均顯著或極顯著低于C組,說明鋁可致大鼠免疫功能抑制。
　　 2.亞慢性鋁中毒大鼠

5、血清中NE含量、脾臟淋巴細胞膜上的β2-AR密度及β2-ARmRNA表達水平和淋巴細胞內(nèi)cAMP含量均顯著或極顯著高于C組,說明鋁能增加外周NE水平,并激活β2-AR-cAMP途徑,直接抑制大鼠免疫功能。
　　 3.亞慢性鋁中毒大鼠下丘腦中NE含量顯著低于C組,血清中CRH、ACTH和Cort含量顯著或極顯著高于C組,說明鋁能抑制突觸前膜對NE的再攝入,提高細胞外NE水平,進而通過激活下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸,間接抑制免

6、疫功能。
　　 4.亞慢性鋁中毒大鼠血清中NE水平與T、B淋巴細胞增值率,脾臟組織中IL-2和TNF-α含量,CD3+、CD4+T淋巴細胞表達率以及CD4+/CD8+的比值均呈顯著負相關(guān),說明NE與鋁的免疫毒性密切相關(guān),外周高水平NE可加重鋁引發(fā)的免疫抑制。
　　 體外實驗結(jié)果表明:
　　 1.應用MTT比色法測得染鋁24h后大鼠脾臟淋巴細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為5.52mmol/L,95％可信區(qū)間為4.7

7、6mmol/L～6.38mmol/L。
　　 2.隨染鋁劑量的增加,大鼠T、B淋巴細胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞表達率和CD4+/CD8+的比值以及淋巴細胞分泌IL-2和TNF-α含量均逐漸降低,W-M組、W-H組顯著或極顯著低于W-C組,W-L組與W-C組比較差異不顯著,說明鋁能抑制淋巴細胞功能,且因為W-M組能引起顯著的免疫抑制,故選擇W-M組作為后續(xù)實驗的研究對象。
　　 3.隨染鋁劑量的增加,

8、大鼠脾臟淋巴細胞膜上的β2-AR密度及β2-ARmRNA表達水平和淋巴細胞內(nèi)cAMP含量高于W-C組,且W-M組、W-H組均極顯著高于W-C組,同時伴隨淋巴細胞免疫功能抑制,說明β2-AR-cAMP途徑是鋁免疫毒性的機制之一。
　　 4.隨NE濃度的增加,淋巴細胞細胞內(nèi)cAMP含量顯著高于N-C組,大鼠T淋巴細胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞表達率和CD4+/CD8+的比值以及淋巴細胞分泌IL-2和TNF-α含量