安神定志靈調控ADHD去甲腎上腺素系統(tǒng)作用機制研究.pdf

1、目的：以自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rat，SHR）、Wistar京都大鼠(Wistar-Kyoto，WKY)為研究對象，探討腦組織不同部位（前額葉皮質、紋狀體、海馬）去甲腎上腺素、多巴胺含量，其代謝調節(jié)因子(TH、DβH、NET)及去甲腎上腺素受體(ADRα2A、ADRα2C)與ADHD發(fā)病的關系;探討安神定志靈調控ADHD去甲腎上腺素系統(tǒng)的作用機制。
　　方法：采用40只SHR大鼠隨

2、機分為5組（模型組、托莫西汀組、安神定志靈低、中、高劑量組），每組8只，WKY大鼠8只作為正常對照組，均為4周齡，雄性。安神定志靈低、中、高劑量組分別按生藥劑量11.85g/(kg·d)，23.7g/(kg·d)，47.4g/(kg·d)灌胃，每日1次;托莫西汀組以5mg/(kg·d)給予灌胃，每日1次;模型組和正常對照組每日按體重給予等量生理鹽水灌胃。實驗4周后處死大鼠，取不同部位腦組織分別用高效液相色譜-熒光法檢測多巴胺、去甲腎上腺

3、素遞質含量，用免疫組化、Western blot法檢測代謝調節(jié)因子(TH、DβH、NET)及去甲腎上腺素受體(ADRα2A、ADRα2C)的蛋白表達情況，采用實時熒光定量PCR法檢測各指標的mRNA表達情況。
　　結果：
　　(1) DA遞質含量:
　　模型組SHR大鼠前額葉皮質DA含量明顯低于正常WKY大鼠(P=0.006)，而托莫西汀和安神定志靈高劑量均可顯著增加DA含量(P＜0.05)，且兩者之間無明顯差異(P=

4、0.591);模型組SHR大鼠紋狀體部位DA含量明顯高于正常WKY大鼠(P=0.000)，托莫西汀和安神定志靈各劑量均能顯著降低DA含量(P=0.000)，且托莫西汀與中藥組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。模型組SHR大鼠海馬DA的含量低于正常組WKY大鼠(P=0.013)，但各治療組與模型組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　(2) NE遞質含量:
　　模型組SHR大鼠前額葉皮質NE含量明顯低于正常組WKY大鼠(

5、P=0.006)，托莫西汀組、安神定志靈中劑量、高劑量組均能顯著增加NE含量(P＜0.05)，且兩兩比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);模型組SHR大鼠紋狀體NE的含量與正常組WKY大鼠無統(tǒng)計學差異(P=0.401);各組大鼠海馬NE含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　(3) NE代謝調節(jié)因子及NE受體蛋白表達水平:
　　前額葉皮質部位:①模型組SHR大鼠前額葉皮質TH、DβH、ADRα2A蛋白的表達水平明顯低于正常組

6、WKY大鼠(P＜0.05)。托莫西汀、中藥高劑量均能顯著上調前額葉皮質TH蛋白表達水平(P＜0.05)，且托莫西汀組TH蛋白明顯高于中藥高劑量組(P＜0.05);托莫西汀、安神定志靈中劑量能顯著上調前額葉皮質DβH蛋白水平(P＜0.05)，兩組之間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);托莫西汀和中藥各劑量均能顯著上調前額葉皮質ADRα2A蛋白水平(P＜0.05)，且以安神定志靈中劑量上調最為顯著(P＜0.01)。②模型組SHR大鼠前額葉皮質NE

7、T、ADRα2C蛋白表達水平明顯高于正常組WKY大鼠(P＜0.01)。托莫西汀、安神定志靈低劑量能顯著下調NET蛋白水平(P＜0.05)，兩者無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);托莫西汀、安神定志靈中劑量均能顯著下調ADRα2C蛋白水平(P＜0.05)，兩者之間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　紋狀體部位:模型組SHR大鼠紋狀體TH、DβH、ADRα2C蛋白表達水平均明顯高于正常組(P＜0.05)。安神定志靈各劑量均能顯著下調TH蛋白

8、表達水平(P＜0.05);托莫西汀、安神定志靈低劑量能顯著下調Dβ[蛋白表達水平(P＜0.05);托莫西汀、安神定志靈中劑量能顯著下調SHR大鼠紋狀體ADRα2C蛋白表達水平(P＜0.05)，兩者之間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。模型組SHR大鼠紋狀體部位NET蛋白表達水平明顯低于正常組(P=0.000)，但托莫西汀、安神定志靈各劑量組對NET均無明顯上調作用;而ADRα2A蛋白水平與正常組WKY大鼠相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。<

9、br>　　海馬部位:模型組SHR大鼠海馬TH、DβH、ADRα2A、ADRα2C蛋白表達水平與正常組WKY大鼠相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，而NET蛋白表達明顯高于正常組WKY大鼠（P＜0.05），托莫西汀、安神定志靈高劑量均能顯著下調NET蛋白表達水平(P＜0.05)。
　　(4) NE代謝調節(jié)因子及NE受體mRNA表達水平:
　　前額葉皮質部位:①模型組SHR大鼠前額葉皮質TH、DβH、ADRα2A mRNA水平明顯

10、低于正常組WKY大鼠(P＜0.05)。托莫西汀、中藥高劑量均能顯著上調前額葉皮質TH mRNA水平(P＜0.05)，且托莫西汀組TH mRNA水平上調最為顯著(P＜0.01);托莫西汀和安神定志靈各劑量均能顯著上調前額葉皮質DβH mRNA水平(P＜0.01);托莫西汀、安神定志靈低劑量能顯著上調前額葉皮質ADRα2A mRNA水平(P＜0.01)，且以中藥低劑量上調最為明顯(P＜0.05)②模型組SHR大鼠前額葉皮質NET、ADRα2

11、CmRNA表達水平明顯高于正常組WKY大鼠(P＜0.05)。托莫西汀、中藥低劑量均能顯著降低前額葉皮質NET mRNA表達水平(P＜0.05)，且兩兩比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;托莫西汀和安神定志靈中劑量、高劑量均能顯著下調ADRα2C mRNA表達水平(P＜0.01)，且尤以中藥高劑量最為顯著(P＜0.05)。
　　紋狀體部位:模型組SHR大鼠紋狀體TH、ADRα2C mRNA表達水平均明顯高于正常組(P＜0.05)，AD

12、Rα2A mRNA表達水平明顯低于正常組WKY大鼠(P=0.000)。安神定志靈中劑量、高劑量均能顯著下調紋狀體TH mRNA表達水平(P＜0.01);托莫西汀、安神定志靈各劑量組均能顯著下調ADRα2C mRNA水平，且以中藥中劑量最為顯著(P＜0.01);托莫西汀、安神定志靈中劑量均能顯著上調ADRα2A mRNA表達水平(P=0.000)，且以托莫西汀上調最為顯著(P=0.017)。模型組SHR大鼠紋狀體DβH、NET mRNA表

13、達水平與正常組WKY大鼠相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　海馬部位:模型組SHR大鼠海馬組織DβH、NET mRNA表達水平明顯高于正常組WKY大鼠(P=0.002)。安神定志靈各劑量組均能顯著下調SHR大鼠海馬DβH mRNA水平(P=0.000);而托莫西汀、安神定志靈中劑量、高劑量劑量均能顯著下調海馬NET mRNA水平(P＜0.05)，且兩組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。模型組SHR大鼠海馬TH、ADRα2A

14、、ADRα2C mRNA表達水平與正常組WKY大鼠相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　結論：
　　(1) SHR大鼠前額葉皮質和紋狀體存在NE/DA遞質失調，PFC主要表現(xiàn)為NE/DA遞質含量的降低，紋狀體主要表現(xiàn)為DA含量的增高，與ADHD發(fā)病有關;ATX和ADL均能調節(jié)NE/DA含量的失衡，且兩者之間無明顯差異，但對海馬DA失調無明顯調節(jié)作用;
　　(2) SHR大鼠前額葉皮質NE/DA遞質的失調與TH、DβH

15、的下調和NET的上調有關，且存在ADRα2A的下調和ADRα2C的上調;ADL作用機制之一可能是通過上調前額葉皮質TH、DβH和下調NET核酸和蛋白水平來發(fā)揮對NE/DA失衡的調節(jié)作用;另一作用途徑是通過調節(jié)受體的失調ADRα2A↑/ADRα2C↓核酸和蛋白水平來發(fā)揮作用;
　　(3)SHR大鼠紋狀體DA含量的升高與TH的表達上調有關，且存在ADRα2A mRNA下調和ADRα2C上調;ADL在紋狀體的作用機制可顯著下調TH抑制D