安神定志靈調(diào)控ADHD模型動(dòng)物多巴胺D1-D2受體信號(hào)通路及脫敏-復(fù)敏的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分中醫(yī)藥治療ADHD實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展及規(guī)范化探討
　　目的:通過檢索相關(guān)文獻(xiàn)，對中醫(yī)藥治療ADHD實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行總結(jié)，結(jié)合國外的最新研究，對實(shí)驗(yàn)中存在的問題進(jìn)行分析、討論，并提出相對合理的解決方案。希望通過此途徑規(guī)范中醫(yī)藥治療ADHD實(shí)驗(yàn)研究，使中醫(yī)藥探討ADHD實(shí)驗(yàn)結(jié)果能更加被國際社會(huì)認(rèn)同。
　　方法:中文檢索中國知網(wǎng)(CNKI)、維普中文期刊數(shù)據(jù)庫(VIP)和萬方數(shù)據(jù)庫;英文檢索Pubmed等數(shù)據(jù)庫，檢索時(shí)間為建庫至20

2、17年3月，中文檢索主題詞為“注意缺陷多動(dòng)障礙”或“注意缺陷”或“ADHD”或“輕微腦功能障礙”，“大鼠”或“小鼠”或“實(shí)驗(yàn)”或“動(dòng)物”，“中醫(yī)”;英文檢索詞為“ADHD”or“hyperactivity”or“attention deficit” or“minimal brain dysfunction”,“Chinese medicine”,“rats” or“mouse”or“experiment”，搜索國內(nèi)中醫(yī)藥學(xué)者發(fā)表的相關(guān)論

3、文。
　　結(jié)果:通過檢索、篩選、去重等過程，本研究共納入中醫(yī)藥治療ADHD實(shí)驗(yàn)相關(guān)文章44篇，另有博士論文4篇，碩士論文6篇，外文期刊未見相關(guān)文章。文獻(xiàn)報(bào)道了中醫(yī)藥及針灸治療ADHD動(dòng)物模型行為學(xué)實(shí)驗(yàn)及作用機(jī)制的相關(guān)研究，通過瀏覽文獻(xiàn)，我們發(fā)現(xiàn)這些報(bào)道在實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、研究方法上存在不足。
　　結(jié)論:盡管國內(nèi)中醫(yī)藥治療ADHD實(shí)驗(yàn)文章存在一些問題，但仍然為中醫(yī)藥探索治療ADHD的作用機(jī)制奠定了一些基礎(chǔ)。從文章內(nèi)容來看，實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物

4、模型、檢測方法、檢測內(nèi)容、檢測儀器越來越與國際接軌。在后期的相關(guān)研究中，我們需要進(jìn)一步嚴(yán)謹(jǐn)?shù)剡M(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并規(guī)范化操作，提高中醫(yī)藥治療ADHD的國際認(rèn)可度。
　　第二部分安神定志靈調(diào)控ADHD模型動(dòng)物多巴胺D1/D2受體信號(hào)通路及脫敏/復(fù)敏的機(jī)制研究
　　目的:研究安神定志靈對注意缺陷多動(dòng)障礙動(dòng)物模型自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneouslyhypertensive rat，SHR)前額葉和紋狀體中多巴胺D1/D2受體信號(hào)通

5、路及受體脫敏/復(fù)敏相關(guān)因子的影響，探討安神定志靈治療注意缺陷多動(dòng)障礙的作用機(jī)制。
　　方法:將50只SHR大鼠運(yùn)用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分為模型組、利他林組（2 mg·kg-1）、安神定志靈低劑量組、中劑量組、高劑量組(6.7、13.4、26.7 g·kg-1)，每組10只，另將Wistar京都大鼠(Wistar Kyoto rat，WKY)設(shè)為正常組。每日灌胃2次，治療4周后取大鼠腦組織。分別用酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白質(zhì)印跡法、免疫組織化學(xué)法

6、及實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測各組大鼠前額葉和紋狀體中Gαs、Golf、 Gαi、AC、cAMP、CDK5、p35、DARPP32、PP1、 CREB、Akt、GSK-3β、β-catenin、PKA、GRK-6、β-arrestin2、NCS-1、PP2A和 PSD-95的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)安神定志靈可以上調(diào)前額葉皮質(zhì)和紋狀體中Gαs、Gαolf和Gαi蛋白和mRNA的表達(dá)水平。(2)安神定志靈可升高SHR大鼠前額葉及紋狀體多巴胺受體下

7、游信號(hào)通路中AC、cAMP的含有量，且增加程度與中藥劑量相關(guān)。(3)安神定志靈可以上調(diào)SHR大鼠前額葉及紋狀體中p35、CDK5及CREB蛋白和mRNA的表達(dá)水平，下調(diào)PP1和DARPP32的表達(dá)水平。(4)安神定志靈可以降低（或有降低趨勢）GSK-3β的相關(guān)表達(dá)，增加（或有增加趨勢）PP2A、Akt和β-catenin相關(guān)表達(dá)。(5)安神定志靈可以提高β-arrestin2、NCS-1、PSD-95、PP2A、PKA表達(dá)的同時(shí)能降低G

8、RK-6的表達(dá)。(6)柴胡皂苷A能夠增加SHR大鼠前額葉DA的含有量，減少SHR大鼠的自發(fā)性活動(dòng)，并且增加其對空間記憶、學(xué)習(xí)的能力，并且能夠降低DAT的相關(guān)表達(dá)，提高BDNF的相關(guān)表達(dá)。
　　結(jié)論:(1)安神定志靈可以上調(diào)前額葉皮質(zhì)和紋狀體中Gαs、Gαolf和Gαi的相關(guān)表達(dá)，進(jìn)而影響多巴胺受體下游的信號(hào)通路，提高AC、cAMP的表達(dá)水平，升高PKA進(jìn)一步影響核內(nèi)基因的表達(dá);與此同時(shí)，安神定志靈能夠上調(diào)SHR大鼠前額葉及紋狀體中

9、CDK5、p35的相關(guān)表達(dá)，從而抑制及PP1和DARPP32的表達(dá)水平，提高CREB表達(dá)水平影響細(xì)胞核內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄。
　　(2)安神定志靈可以通過骨架蛋白β-arrestin2對SHR大鼠非G蛋白介導(dǎo)多巴胺的信號(hào)通路產(chǎn)生影響。通過降低GSK-3β的相關(guān)表達(dá)，增加PP2A、Akt和β-catenin相關(guān)表達(dá)，從而有效地將胞外信號(hào)傳至胞內(nèi)，影響細(xì)胞核內(nèi)靶基因的表達(dá)從而達(dá)到治療目的。
　　(3)安神定志靈可以對多巴胺受體脫敏/復(fù)敏

10、相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生影響，通過提高β-arrestin2、NCS-1、PSD-95、PP2A、PKA的相關(guān)表達(dá)，降低GRK-6的相關(guān)表達(dá)從而減少多巴胺受體脫敏的發(fā)生，保持多巴胺受體的數(shù)量和活性，保證其與DA的結(jié)合并發(fā)揮相應(yīng)的生物效應(yīng)。
　　(4)柴胡皂苷A具有改善SHR大鼠自發(fā)性活動(dòng)的作用，其潛在的作用機(jī)制在于降低DAT的相關(guān)表達(dá)，保持DA的濃度，并增加BDNF的相關(guān)表達(dá)。
　　附篇基于270例臨床研究探討兒童多動(dòng)癥中醫(yī)證型分布及演

11、變規(guī)律
　　第三部分目的:基于270例臨床病例探索兒童多動(dòng)癥的中醫(yī)證型分布特點(diǎn)及治療過程中的證型變化，為辨證治療兒童多動(dòng)癥提供依據(jù)。
　　方法:觀察全國9家單位收集的270例多動(dòng)癥患兒的證型變化，運(yùn)用SPSS22.0進(jìn)行分析，總結(jié)兒童多動(dòng)癥中醫(yī)證型的分布及變化特點(diǎn)。
　　結(jié)果:270例患兒中，初診時(shí)以心肝火旺證居多，占40.4％，治療后期以肝腎陰虛證多見，占47.8％?！毒裾系K診斷與統(tǒng)計(jì)手冊》第5版(DSM-V)西醫(yī)