結(jié)節(jié)性硬化癥的表型分析及基因診斷研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)節(jié)性硬化癥(Tuberous sclerosis complex，TSC)是一種常染色體顯性遺傳的神經(jīng)皮膚綜合征，常以錯(cuò)構(gòu)瘤的形式累及多個(gè)臟器系統(tǒng)。該病由Bourneville于1880年首先報(bào)道，故又稱Bourneville病。臨床特征表現(xiàn)為智力低下、癲癇、脂腺瘤等。發(fā)病率約為1∶10000-1∶6000，男女發(fā)病之比為2∶1，無(wú)明顯種族差異。其皮膚病變出現(xiàn)較早，患者往往先至皮膚科就診。但中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、肺等器

2、官的病變可引發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥，預(yù)后較差，常?？晌＜吧?。所以，該病的早期診斷和早期治療十分重要。目前，該病的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)及影像學(xué)改變。由于結(jié)節(jié)性硬化癥具有遺傳異質(zhì)性，不同結(jié)節(jié)性硬化癥患者之間的臨床表現(xiàn)差異很大，即使在同一家系中不同成員的臨床表現(xiàn)也可能存在差異。同時(shí)，結(jié)節(jié)性硬化癥較為少見(jiàn)，涉及多個(gè)學(xué)科，部分臨床醫(yī)生對(duì)本病缺乏足夠的認(rèn)識(shí)。因此，本病很容易被漏診、誤診。臨床醫(yī)生要想正確的診斷該病首先要全面認(rèn)結(jié)節(jié)性節(jié)性硬化癥的表型，這樣才能

3、做到早期診斷，同時(shí)也有助于早期發(fā)現(xiàn)并及早對(duì)患者進(jìn)行有效的治療，盡量避免致命的并發(fā)癥的發(fā)生。
　　結(jié)節(jié)性硬化癥的致病基因?yàn)門SC1基因、TSC2基因。其中TSC1基因位于9q34.2，TSC2基因位于16p13.3。TSC1基因包含23個(gè)外顯子，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物編碼由1164個(gè)氨基酸組成的錯(cuò)構(gòu)瘤蛋白(hamartin);TSC2基因含有42個(gè)外顯子，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物編碼由1807個(gè)氨基酸組成的馬鈴薯球蛋白(tuberin)。Hamartin蛋白和t

4、uberin蛋白在細(xì)胞內(nèi)形成異二聚體(heterodimer)，通過(guò)TSC-Rheb-T0RS6K1/4EBP1途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，并進(jìn)一步參與細(xì)胞黏附等生物學(xué)功能。TSC1基因突變主要是點(diǎn)突變引起的無(wú)義突變或錯(cuò)義突變，以及小的插入或缺失引起的移碼突變;而TSC2基因突變則形式多樣，包括無(wú)義突變(nonsense mutation)、錯(cuò)義突變(missense mutation)、剪接突變(splicing mutation)、微小的插入

5、或缺失突變(insertion or deletion mutation)以及大片斷的缺失，其中85％是小的突變，15％是大的缺失或重排。有關(guān)這二個(gè)基因的熱點(diǎn)突變，國(guó)內(nèi)外均有研究，TSC1基因外顯子15、17、18的突變報(bào)道較多，如2105delAAAG、R786X在多個(gè)家族性和散發(fā)患者中發(fā)生。van Slegtenhorst等認(rèn)為TSC1基因突變一半以上位于外顯子15和17，但TSC2基因熱點(diǎn)突變研究相對(duì)較少，也未得到一致結(jié)論。國(guó)外發(fā)

6、現(xiàn)TSC基因突變類型及方式復(fù)雜;國(guó)內(nèi)對(duì)于TSC分子遺傳學(xué)的研究剛剛起步，這可能主要與TSC1基因及TSC2基因外顯子多、研究難度大、成本高有關(guān)。
　　本研究分析兒童結(jié)節(jié)性硬化癥的表型特點(diǎn)，同時(shí)建立小兒結(jié)節(jié)性硬化癥的基因診斷方法，分析其致病基因突變，以便早期診斷本病并及早發(fā)現(xiàn)重要內(nèi)臟器官的病變，這對(duì)于提高本病的診治水平，特別是產(chǎn)前診斷水平，改善患者的預(yù)后具有重要意義。
　　第一部分:結(jié)節(jié)性硬化癥的的表型分析
　　目的:<

7、br>　　總結(jié)并分析兒童結(jié)節(jié)性硬化癥的表型特點(diǎn)，提高對(duì)本病的認(rèn)識(shí)，進(jìn)而達(dá)到早期診斷、早期治療的目的，并及早發(fā)現(xiàn)重要內(nèi)臟器官的病變，改善患者的預(yù)后，降低致殘率和病死率。
　　方法:
　　收集了2009年9月至2014年9月在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院兒內(nèi)科診治的結(jié)節(jié)性硬化癥31例，對(duì)每一病例及家系成員進(jìn)行詳細(xì)的病史資料采集，進(jìn)行系統(tǒng)的體格檢查，一般資料和臨床表現(xiàn)的調(diào)查采用自制的調(diào)查表進(jìn)行，大部分病人行頭顱CT平掃和/或磁共振成像(M

8、RI)檢查，肝、雙腎、膽、脾、胰B超，胸部正側(cè)位X線、手足正側(cè)位X線攝片、眼科檢查（包括眼底檢查）。部分病人行超聲心動(dòng)圖檢查、外周血染色體核型分析（包括常規(guī)核型分析）。頭顱CT平掃和增強(qiáng)掃描采用日立公司PRATIC型螺旋CT掃描機(jī)和GE公司的Sytec4000型全身CT掃描機(jī)，對(duì)比劑用北京產(chǎn)碘海醇，劑量為100ml。磁共振成像采用GE公司0.2T永磁MRI掃描機(jī)。已在外院檢查過(guò)CT或磁共振成像者，則重新閱片后記錄結(jié)果。B超采用飛利浦AT

9、L3500 B超儀。
　　結(jié)果:
　　31例散發(fā)性和家族性結(jié)節(jié)性硬化癥患兒最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)是室管膜下結(jié)節(jié)，其次為色素缺失斑、癲癇發(fā)作和腦皮質(zhì)結(jié)節(jié)。
　　結(jié)論:
　　結(jié)節(jié)性硬化癥是一種多器官受累的系統(tǒng)性疾病，表型多樣，兒童患者以神經(jīng)科和皮膚科異常為主，因此臨床各科醫(yī)生應(yīng)了解結(jié)節(jié)性硬化癥的臨床表現(xiàn)，了解本病常累及的系統(tǒng)器官。一旦明確診斷，應(yīng)注意那些會(huì)引起嚴(yán)重并發(fā)癥的相關(guān)病變檢查，以便及早采取治療措施。
　　第二

10、部分:結(jié)節(jié)性硬化癥的基因診斷研究
　　目的:
　　建立并應(yīng)用結(jié)節(jié)性硬化癥的基因診斷方法，分析小兒結(jié)節(jié)性硬化癥的致病基因突變情況，提高結(jié)節(jié)性硬化癥的診斷水平，特別是產(chǎn)前診斷水平。
　　方法:
　　收集結(jié)節(jié)性硬化癥患兒外周靜脈血，提取基因組DNA，PCR擴(kuò)增TSC1、TSC2基因的全部外顯子及其剪接區(qū)，并對(duì)部分結(jié)節(jié)性硬化癥患兒進(jìn)行了基因診斷，檢測(cè)其TSC1基因和TSC2基因的突變。
　　結(jié)果:
　　1.成

11、功擴(kuò)增了TSC1基因外顯子1-23、TSC2基因外顯子0-41及其剪接區(qū);
　　2.發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了新的TSC2基因突變即IVS29+1G＞C，c.5090-5092delCCA-inAG。
　　結(jié)論:
　　1.建立了兒童結(jié)節(jié)性硬化癥的基因診斷方法，有助于結(jié)節(jié)性硬化癥的基因診斷，為TSC患者與家庭的遺傳咨詢以及關(guān)乎下一代健康的產(chǎn)前診斷提供了理論和技術(shù)支持，為減少病殘兒的出生做出貢獻(xiàn)。
　　2.發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了新的TSC基