p16-CyclinD1-CDK4-6-pRb通路在非小細胞肺癌中表達及其與預后關系的研究.pdf

1、目的:通過檢測、分析正常肺組織和非小細胞肺癌(non-smal1-cell lung cancer，NSCLC)中多腫瘤抑制基因(multipletumor-suppressor1，MTS1又稱p16)，細胞周期蛋白(CyclinD1)和視網(wǎng)膜母細胞瘤基因(Retinoblastoma gene, Rb)，探討p16-CyclinD1-CDK4/6-Rb通路在非小細胞肺癌(NSCLC)發(fā)病機制中的作用及與預后的關系。
　　方法:運

2、用免疫組化、分子生物學技術(PCR，PCR-SSCP，MSP，DNA測序和DPCR技術等)和病理學技術對人體正常肺組織，非小細胞肺癌癌組織中細胞周期相關基因p16，cyclinD1和Rb，從蛋白質和DNA水平改變及其相互關系進行研究，并結合臨床病理資料和隨訪資料進行分析。
　　結果:
　　1.應用免疫組化技術檢測p16、CyclinD1和Rb的表達，結果顯示NSCLC中p16-CyclinD1-Rb通路總異常率為97.6％(

3、82/84):p16、RB和CyclinD1的異常表達率分別為38.1％，51.2％和54.8％:提示p16-cyclinD1-Rb通路異常與NSCLC發(fā)病機制密切相關，三種蛋白的異?？蓡为毣蚬餐l(fā)揮作用。p16與Rb表達呈明顯的負相關關系(P＜0.01);而CyclinD1與RB表達呈正相關(P＜0.05)。Rb表達與NSCLC的分化程度呈負相關(P＜0.05)，提示其可能在腫瘤的演進中發(fā)揮作用。
　　2.應用PCR-SSCP,

4、 MSP和DNA測序技術檢測p16基因狀態(tài)。共發(fā)現(xiàn)24/76例(31.6％) LMS中有p16基因異常，其中18例(23.7％)發(fā)生啟動子區(qū)5'CpG島甲基化，4例發(fā)生基因突變（2例在第2外顯子編碼區(qū)，2例在第2外顯子與內含子接頭處），2例存在純合缺失。24例p16基因異常的NSCLC中p16蛋白陰性20例，弱陽性4例.研究結果提示p16基因失活與NSCLC的發(fā)病機制有關。啟動子區(qū)5'CpG島的甲基化是NSCLC中p16基因失活的主要方

5、式，但也有少量點突變和缺失。
　　3.應用DPCR技術檢測CCND1基因擴增。結果顯示16/76例(21.1％)NSCLC存在CCND1基因擴增，均伴CyclinD1過表達。但仍有32/48例(66.7％) cyclinD1過表達的病例未檢測到CCND1擴增。實驗結果提示CCND1基因擴增在中NSCLC較為常見，是引起CyclinD1過表達的原因之一，可能與NSCLC發(fā)病機制有關。
　　4.本研究回訪率51.2％，中位生存期

6、為24個月。采用Cox比例風險回歸模型評估各因素。單因素分析發(fā)現(xiàn)患者年齡、腫瘤大小、分化程度、組織類型CyclinD1表達以及轉移與患者死亡率相關，是有意義的預后因素。多因素分析則僅發(fā)現(xiàn)p16表達、腫瘤大小和有無轉移是獨立的預后指標。P16、CyclinD1和Rb聯(lián)合檢測對NSCLC進展及預后的評估有一定的臨床價值。
　　結論:p16-cyclinD-pRB通路異常與NSCLC發(fā)病機制密切相關。啟動子區(qū)5'CpG島甲基化是NSCL