ECHO30所致無菌性腦膜炎爆發(fā)的流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究.pdf

1、目的：本研究的主要目的是對2003年濟(jì)南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)開展全面的調(diào)查，從現(xiàn)場流行病學(xué)的角度出發(fā)，初步描述所有病例的“三間”分布等基本情況，探討其流行因素；同時(shí)，結(jié)合血清流行病學(xué)、病毒學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，運(yùn)用已經(jīng)建立的血清中和抗體檢測、腸道病毒分離鑒定和RT-PCR快速診斷等方法，從病原學(xué)上明確病因，并對分離到ECHO30的VP1段進(jìn)行基因序列的測定和分析，確定ECHO30山東分離株的基因型及其變異程度。 材料與方法：所有

2、病例信息來源于2003年章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)調(diào)查的資料，包括發(fā)病情況調(diào)查和個(gè)案調(diào)查。病原學(xué)標(biāo)本來源于爆發(fā)期內(nèi)采集的43份糞便標(biāo)本和24份急性期、14份恢復(fù)期血清標(biāo)本。病毒的分離、型別鑒定以及血清中和抗體試驗(yàn)按照WHO《脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室手冊》規(guī)定的方法進(jìn)行；19株陽性分離株，經(jīng)Trizol試劑提取總RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)合成互補(bǔ)脫氧核糖核酸(cDNA)，PCR產(chǎn)物純化后測定VP1基因的全長。借助Sequench

3、er，Bioedit，Mega2.1等軟件進(jìn)行結(jié)果分析。血清流行病學(xué)標(biāo)本采用按比例多級抽樣方法，n=(ts)2/δ=38，設(shè)置7個(gè)年齡組，發(fā)病地區(qū)(病例組)和未發(fā)病地區(qū)(對照組)各取2各鄉(xiāng)鎮(zhèn)，以每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)每個(gè)年齡組20人為標(biāo)準(zhǔn)，每人采集靜脈血3ml。得到血清標(biāo)本病例組397份，對照組248份，運(yùn)用中和抗體試驗(yàn)技術(shù)，測定血清中和抗體的滴度。以上所得結(jié)果用SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。 結(jié)果：2003年6～9月，濟(jì)南章丘市發(fā)生了

4、無菌性腦膜炎的爆發(fā)，發(fā)病高峰集中在7～8月，發(fā)病1743例，發(fā)病年齡集中在15歲以下，本次爆發(fā)的罹患率1.81‰，5～9歲年齡組高發(fā)，占全部病例數(shù)的55％，男女性別比1.57∶1，按照罹患率大小的空間分布，本次爆發(fā)以明水鎮(zhèn)為中心，向東呈扇形分布，臨床表現(xiàn)以發(fā)熱(94.56％)、頭痛(95.96％)、嘔吐(82.87％)為主，預(yù)后良好，無致死病例出現(xiàn)。病原學(xué)結(jié)果提示引起爆發(fā)的病原體為單一的人類腸道病毒ECHO30；理化特性顯示，該分離株為

5、具有“D”特征的強(qiáng)毒株，致病力強(qiáng)。分離株基因序列測定的結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)病原體為ECHO30，但相較于Bastianni標(biāo)準(zhǔn)株，已經(jīng)出現(xiàn)了核苷酸序列的變異，進(jìn)化樹顯示ECHO30山東章丘株已經(jīng)與2003年山東泰安株、浙江株共同形成了新的基因組；同時(shí)認(rèn)為，分子生物學(xué)診斷方法的確立和運(yùn)用，將加速病原學(xué)診斷的過程，降低對病患的傷害，提高經(jīng)濟(jì)和社會效益。血清流行病學(xué)結(jié)果證實(shí)，章丘地區(qū)確實(shí)存在ECHO30爆發(fā)和流行，15歲以下健康兒童的中和抗體GMT

6、達(dá)到了1∶53.08，高于對照地區(qū)的GMT(1∶32.45)，中和抗體滴度分布集中在1∶64～1∶256之間，抗體陽性率達(dá)到90.93％，提示疾病流行過后，人群具有一定的免疫力。流行因素分析認(rèn)為，此次爆發(fā)應(yīng)歸結(jié)為以下幾個(gè)因素共同的作用，該地區(qū)多年未曾有過ECHO30所致疾病的流行，易感人群累積較多；病原體ECHO30亞型發(fā)生了核苷酸的變異，形成了新的基因組，并且毒力較以往的流行株有所提升，具有了強(qiáng)毒株的“D”特征；當(dāng)?shù)氐淖匀坏乩項(xiàng)l件和飲