免疫淀粉微球的制備及其在氯霉素檢測中的應(yīng)用.pdf

1、免疫淀粉微球是免疫學(xué)和變性淀粉技術(shù)結(jié)合而發(fā)展起來的一類新型材料。免疫淀粉微球是交聯(lián)有抗體的淀粉微球，可與含有相應(yīng)抗原的靶物質(zhì)特異性地結(jié)合形成新的復(fù)合物。通過離心，這種復(fù)合物可被滯留，與其它組分相分離。免疫親和分離簡便易行，分離純度高，保留靶物質(zhì)活性，且高效、快速、低毒，可廣泛應(yīng)用于細(xì)胞分離和提純、免疫檢測、核酸分析和基因工程、作靶向釋藥的載體等領(lǐng)域。 本文以可溶性淀粉為原料，環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑，Span60為表面活性劑，通過反相

2、懸浮法合成淀粉微球。制備氯霉素抗原免疫小鼠，得到鼠抗氯霉素抗體。再利用環(huán)氧氯丙烷的活化淀粉微球，在微球表面交聯(lián)上氯霉素抗體，合成免疫淀粉微球，并對免疫淀粉微球的抗體交聯(lián)率進(jìn)行了研究。探討了工藝條件改變對免疫淀粉微球交聯(lián)率的影響規(guī)律。以免疫淀粉微球?yàn)楣潭ㄏ?，采用間接法檢測抗體交聯(lián)情況，采用倒置熒光顯微鏡觀察。以交聯(lián)率為考察指標(biāo)，通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)得到了此反應(yīng)的最佳合成條件。同時(shí)討論了反應(yīng)時(shí)交聯(lián)率與淀粉微球粒徑和抗體濃度的匹配關(guān)系。采用標(biāo)準(zhǔn)加入法

3、測定交聯(lián)有氯霉素抗體的免疫淀粉微球分離氯霉素，紫外分光光度法檢測分離的氯霉素。 研究表明，淀粉微球的環(huán)氧活化度隨活化劑環(huán)氧氯丙烷用量的增大先增大然后基本保持不變。當(dāng)環(huán)氧氯丙烷用量為0.4mL/g時(shí)，所制備的淀粉微球的活化度達(dá)到最大值。淀粉微球的環(huán)氧活化度隨振蕩反應(yīng)速率的增加先增加，達(dá)到一定值后不再有明顯變化，當(dāng)振蕩速率在200r/min時(shí)活化度達(dá)到恒定值。免疫淀粉微球的交聯(lián)率隨溫育時(shí)間的增大先增大而后基本保持不變，當(dāng)溫育時(shí)間在1

4、小時(shí)后，免疫淀粉微球的交聯(lián)率基本不再變化。免疫淀粉微球的交聯(lián)率4℃反應(yīng)時(shí)間的增加先是增大，增大幅度有限，在時(shí)間達(dá)到9小時(shí)之后，交聯(lián)率達(dá)到60％左右，之后交聯(lián)率不再上升。免疫淀粉微球的交聯(lián)率在pH值為8時(shí)，所合成的免疫淀粉微球的交聯(lián)率最大。熒光倒置顯微鏡觀察免疫淀粉微球表面呈現(xiàn)綠色熒光，說明在堿性條件下，交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷首先與淀粉微球上羥基通過氯取代連接，而環(huán)氧基團(tuán)進(jìn)一步與抗體的氨基發(fā)生了交聯(lián)反應(yīng)，得到了粒徑均勻，表面交聯(lián)有抗體的免疫淀粉