干細(xì)胞抗原陽性細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的初步研究.pdf

1、目的：肝細(xì)胞移植是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一項(xiàng)細(xì)胞移植工程技術(shù)，與原位肝移植比較，它具有操作簡單和可重復(fù)進(jìn)行的特點(diǎn)。但由于目前主要的供體來源是成熟的肝細(xì)胞和胎肝細(xì)胞，仍面臨移植后的肝細(xì)胞增殖能力差、受損肝實(shí)質(zhì)的替代程度欠佳、肝功能支持的時(shí)間短以及免疫排斥等諸多問題，使得移植效果仍欠理想。鑒于上述應(yīng)用成熟肝細(xì)胞和胎肝細(xì)胞進(jìn)行移植的缺陷以及骨髓干細(xì)胞體外增殖的困難造成供體的缺乏；并且根據(jù)骨髓與肝臟間存在聯(lián)系，在胚胎發(fā)育一定時(shí)期內(nèi)含大量的造

2、血干細(xì)胞，具有更強(qiáng)的自我復(fù)制增殖和分化潛能。本研究利用胚胎時(shí)的肝臟具有豐富的造血干細(xì)胞，通過免疫磁性分離法分離胚胎造血干細(xì)胞中的胎肝干細(xì)胞抗原陽性細(xì)胞(Sca-1+細(xì)胞)亞群，建立合適的體外誘導(dǎo)體系，誘導(dǎo)Sca-1+細(xì)胞向肝細(xì)胞或肝細(xì)胞前體分化。并且研究胚胎肝臟Sca-1+細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的機(jī)制，為解決移植干細(xì)胞的供體缺乏和移植后細(xì)胞增生困難提供新的思路及完善造血干細(xì)胞橫向分化的理論，并且為提高肝細(xì)胞移植的臨床療效和擴(kuò)展造血干細(xì)胞的應(yīng)用

3、范圍提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：取孕14.5天的C57BL/6j母鼠剖腹取出胎鼠，剪碎肝臟制成單細(xì)胞懸液，離心去除細(xì)胞碎片后，進(jìn)行Sca-1+細(xì)胞的分離。于分離前后分別通過臺(tái)盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞活性和用流式細(xì)胞術(shù)分析Sca-1+細(xì)胞的純度和產(chǎn)量。把Sca-1+細(xì)胞分成兩個(gè)組，實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)體系中同時(shí)加入HGF和aFGF兩種促肝干細(xì)胞增殖分化的因子，對(duì)照組不加入任何生長因子，觀察肝細(xì)胞的增殖和分化。于誘導(dǎo)的第0、7、14、21和28天分

4、別進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)檢測細(xì)胞白蛋白(ALB)、轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白mRNA水平表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測ALB、AFP和CK8/18蛋白水平的表達(dá)以及通過細(xì)胞糖原染色和尿素合成功能來檢測分化細(xì)胞是否具有肝細(xì)胞功能。 結(jié)論：1.通過免疫磁性分離法可分離出胎肝造血干細(xì)胞Sca-1+細(xì)胞亞群。并且證實(shí)了用MiniMACS方法分離出來的Sca-1+細(xì)胞具有純度高、回收率高和細(xì)胞存活率高的特點(diǎn)。 2