泡狀棘球蚴感染誘導(dǎo)免疫耐受的實驗研究.pdf

1、目的：建立Lewis大鼠泡狀棘球蚴感染模型后，進行BN大鼠對泡狀棘球蚴感染Lewis（簡稱LEW）大鼠異位心臟移植，觀察Lewis大鼠感染泡球蚴后，免疫系統(tǒng)發(fā)生的變化對移植心臟的影響，初步探討其相關(guān)的發(fā)生機制，亦觀察免疫抑制劑FK506、驍悉以及抗包蟲藥L-ABZ對感染泡球蚴大鼠移植心臟的療效。
　　方法：1）采用大鼠右下腹腔直接注射接種泡狀棘球蚴懸浮液的方式，建立泡狀棘球蚴感染的動物模型；2）建立大鼠頸部異位心臟移植模型，LEW

2、大鼠為受體，Brown Norway（簡稱BN）大鼠為供體。將供心主動脈與肺動脈分別與受體右頸總動脈和右頸外靜脈吻合；3）分別行BN大鼠對未感染泡球蚴LEW大鼠（即對照組）及BN大鼠對泡球蚴感染LEW大鼠（即實驗組）異位心臟移植，術(shù)后觀察異位移植心臟的存活時間，移植心臟發(fā)生排斥后進行組織病理學(xué)和免疫組化法檢測，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定血清內(nèi)白細胞介素4（IL-4）和γ干擾素（IFN-γ）水平，免疫組化法檢測排斥心肌組織內(nèi)T

3、細胞及嗜酸性粒細胞的浸潤，細胞流式檢測法（FACS）分別檢測對照組和實驗組大鼠脾內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（CD4+CD25+Treg細胞）數(shù)量水平情況；4）建立BN大鼠對泡球蚴感染LEW大鼠異位心臟移植模型。實驗動物分組：將感染泡球蚴的LEW大鼠隨機分為下列實驗組Group1BN→LEW（n=9）：未治療；Group2 BN→LEW（n=9）：L-ABZ50mg/kg/d灌胃，每日一次；Group3 BN→LEW（n=9）：FK

4、5061mg/kg/d灌胃，每日一次；Group4（n=9）：FK5061mg/kg/d、L-ABZ50mg/kg/d灌胃，每日一次；Group5 BN→LEW（n=9）：FK5061mg/kg/d、MMF20mg/kg/d；灌胃，每日一次；Group6 BN→LEW（n=9）：FK5061mg/kg/d、MMF20mg/kg/d、L-ABZ50mg/kg/d灌胃，每日一次。判斷心臟排斥后，觀察移植物存活時間及移植心組織內(nèi)浸潤嗜酸性粒細

5、胞數(shù)量的變化；5）選用30只健康LEW大鼠隨機分組并行藥物口服灌藥干預(yù)，口服灌藥后，在不同時點2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h斷尾采血，并連續(xù)灌藥三天達到穩(wěn)態(tài)濃度后處死采血，各時點血樣用HPLC法測定血中阿苯噠唑及代謝產(chǎn)物砜和亞砜的濃度。
　　結(jié)果：1）接種泡狀棘球蚴LEW大鼠，用開腹肉眼、常規(guī)病理切片檢測感染率。泡球蚴感染大鼠三個月后感染率約為96.0％；2）正式實驗中同種異體組行大鼠頸部異位心臟移植

6、50例，術(shù)后100％復(fù)跳，3天存活率為96.0％，供心缺血時間均少于35分鐘。同種異體移植心存活時間平均8天左右7.89±1.65d，病理檢查可見典型排斥反應(yīng)征象；同系移植組10例，移植心均存活至處死取材（6例＞11天，4例＞3個月后處死不再觀察生存期）。同系移植組移植心臟病理切片未見明顯心肌損害；3）實驗組（即感染泡球蚴組）移植心存活時間為16.17±3.19天，對照組（即未感染泡球蚴組）移植心存活時間7.92±1.93天，實驗組移植

7、心存活時間較對照組移植心存活時間明顯延長，兩者有顯著性的統(tǒng)計學(xué)差異（P≤0.05）。實驗組移植心的組織病理學(xué)分級（平均分級為3.38級）與對照組（平均分級為3.79級）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。移植心臟發(fā)生排斥反應(yīng)后，實驗組血清內(nèi)IL-4水平為152.21±45.62ng/L高于對照組50.85±22.15ng/L，而實驗組血清內(nèi)IFN-γ水平為12.35±1.02ng/L水平低于對照組42.63±4.15ng/L，兩組差

8、異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05）；FACS流式檢測結(jié)果提示實驗組大鼠血內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量為10.8%，高于對照組的6.1%，兩組差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；4）除FK506+MMF組移植心存活時間較感染對照組有所延長外（16.11±8.04 vs11.60±6.02，P≤0.05），其余各組的移植心存活時間未見延長（P＞0.05）。單純的L-ABZ不會影響移植物的存活且L-ABZ與FK506+MMF可能有

9、一定的拮抗作用；5）FK506與L-ABZ在代謝方面存在著一定的相互影響：FK506與L-ABZ在代謝方面可能存在著一定的相互影響；FK506與L-ABZ單次聯(lián)合用藥以后，ABZ在大鼠體內(nèi)代謝為ABZSX、ABZSN的總量低于單獨使用L-ABZ；FK506與L-ABZ連續(xù)或長期聯(lián)合用藥可能對ABZ的代謝及代謝產(chǎn)物的濃度產(chǎn)生一定的影響。
　　結(jié)論：1）通過向?qū)嶒灤笫笥蚁赂骨蛔⑸渑萸蝌蕬腋∫旱姆绞浇⒋笫笈萸蝌矢腥灸Ｐ褪浅晒Φ?，適用于

10、大批量動物實驗研究；2）應(yīng)用Cuff技術(shù)建立大鼠異位心臟移植模型，明顯降低了手術(shù)難度，具有手術(shù)創(chuàng)傷小、供心缺血時間短等優(yōu)點，簡單實用，制模成功率高；3）泡狀棘球蚴感染造成Th1/Th2向Th2類細胞因子偏移，并且可能通過介導(dǎo)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量增加而導(dǎo)致大鼠異位移植心臟存活時間延長，其可能是誘導(dǎo)移植免疫耐受的原因之一；4）單純的L-ABZ不會影響移植物的存活；L-ABZ與FK506+MMF可能有一定的拮抗作用；5）FK50