白楊素對(duì)TRAIL誘導(dǎo)人肝癌Bel-7402細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、研究目的:
　　白楊素(chrysin, ChR)是否通過(guò)上調(diào)死亡受體5(Death receptor5, DR5)增敏腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)誘導(dǎo)人肝癌Bel-7402細(xì)胞凋亡作用。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人肝癌Bel-7402細(xì)胞。采用MTT法測(cè)定細(xì)胞活性。碘化丙啶(PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)定量分析細(xì)胞凋亡率。D

2、NA瓊脂糖凝膠電泳確證誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞DR5蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　MTT比色法測(cè)定結(jié)果表明,單用 ChR或 TRAIL處理48小時(shí)對(duì)人肝癌Bel-7402細(xì)胞增殖活性抑制作用的半數(shù)抑制濃度(IC50值)分別為252μmol/L和664 ng/mL,然而,用40μmol/L ChR預(yù)孵育30分鐘后,再加入TRAIL處理48小時(shí), IC50值為91 ng/mL,合并用藥效應(yīng)的CI

3、值是0.497。 PI染色FCM分析表明,單用40μmol/L ChR或100 ng/mL TRAIL作用48小時(shí),細(xì)胞凋亡率(亞二倍體DNA含量細(xì)胞百分率)分別為4.92％±0.38%和6.32%±0.39%,但是,用40μmol/L ChR預(yù)孵育30分鐘后,再加入100 ng/mL的TRAIL處理48小時(shí),細(xì)胞凋亡率為31.3%±2.50%;DR5/Fc(1μg/mL)能夠使亞毒性濃度的ChR與TRAIL合用的人肝癌 Bel-740

4、2細(xì)胞凋亡率從32.4%±0.47%下降到15.2%±0.38%(P<0.05)。DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示,40μmol/L ChR預(yù)孵育30分鐘后,再加入100 ng/mL的TRAIL處理48小時(shí),在人肝癌Bel-7402細(xì)胞,展示出典型DNA梯形條帶圖譜。Western Blot分析結(jié)果發(fā)現(xiàn), ChR以濃度和時(shí)間依賴(lài)的方式上調(diào)Bel-7402細(xì)胞DR5表達(dá);DR5嵌合蛋白能夠有效對(duì)ChR上調(diào)Bel-7402細(xì)胞DR5表達(dá)。