粗江蘺多糖對輻射損傷小鼠免疫功能的影響.pdf

1、【目的】 目前放療仍是治療惡性腫瘤的重要手段，但也引起機(jī)體免疫功能低下等副作用。因此，研究具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物已成為人們關(guān)注的課題。多糖是生物有機(jī)體除蛋白質(zhì)和核酸之外的第三類生物大分子，主要以糖蛋白、糖脂和蛋白聚糖的形式存在。多糖作為信息分子廣泛參與細(xì)胞間配體與受體的相互識別、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生理過程，與細(xì)胞活化、增殖、分化及細(xì)胞因子的產(chǎn)生等有關(guān)。大量研究表明，海藻多糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的作用。本課題以湛江海域粗江蘺海藻

2、(Gracilaria Gigas Hartvey，GGH)為原料，研究粗江蘺多糖(Gracilaria GigasHarvey Polvsaccharides．GHPS)對輻射損傷小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制，為開發(fā)天然免疫調(diào)節(jié)藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 【方法】 1．粗江蘺多糖的提取和鑒定 (1)用熱水浸提和乙醇沉淀的方法提取粗江蘺多糖。 (2)通過理化實(shí)驗(yàn)、等離子體發(fā)射光譜、紫外光譜和紅外光譜等方法分析多糖

3、的純度、礦物元素、理化性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)及單糖組成。 2．粗江蘺多糖對輻射損傷小鼠免疫功能的影響 (1)組織切片觀察GHPS對輻射損傷小鼠胸腺和脾組織的影響。 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠胸腺和脾細(xì)胞周期、血細(xì)胞表面CD3、CD4、CD8、CD25的表達(dá)。 (3)<'3>H-TdR 摻入法檢測小鼠胸腺和脾細(xì)胞DNA合成的變化。 (4)胸腺細(xì)胞增殖法檢測巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1的能力。 (5)脾細(xì)胞增殖

4、法檢測脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的能力。 (6)比色法檢測巨噬細(xì)胞吞噬功能的變化。 (7)酶釋放法檢測NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的能力。 (8)比色法檢測血清溶血素。 3．粗江蘺多糖對輻射損傷小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)機(jī)制 (1)熒光分光光度計(jì)檢測胸腺和脾細(xì)胞胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的變化。 (2)酶標(biāo)儀檢測巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞產(chǎn)生NO的能力。 (3)放射免疫法檢測胸腺和脾細(xì)胞胞內(nèi)cAMP和cGMP濃度的變化。

5、 (4)RT-PCR 法檢測脾細(xì)胞 NF-кB mRNA的表達(dá)。 【結(jié)果】 1．粗江蘺多糖的提取和鑒定應(yīng)用熱水浸提和乙醇沉淀的方法從粗江蘺海藻中成功提取灰白色粉末狀多糖，提取率達(dá)14.98％。等離子體發(fā)射光譜分析表明GHPS含多種有益人體的礦物元素，紫外光譜分析表明該多糖不含蛋白質(zhì)，紅外光譜分析表明GHPS是一種酸性多糖，含有硫酸基、乙?；⒏事短腔推咸烟腔?。 2．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究粗江蘺多糖對輻射損傷小鼠免

6、疫功能的影響 (1)小鼠全身接受2Gy γ射線照射后，胸腺和脾細(xì)胞功能明顯降低。 (2)組織切片觀察結(jié)果顯示GHPS可以拮抗輻射引起的小鼠胸腺皮質(zhì)萎縮和脾小結(jié)減少。 (3)<'3>H-TdR 摻入法結(jié)果表明，GHPS 可以促進(jìn)輻射損傷小鼠胸腺和脾細(xì)胞DNA 合成。 (4)GHPS可以緩解輻射所致的小鼠胸腺和脾細(xì)胞G<,1>期阻滯，使S期和G<,2>/M期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加。 (5)GHPS可以拮抗輻射

7、引起的血細(xì)胞表面抗原(CD3、CD4、CD8、CD25)減少。 (6)GHPS能夠增強(qiáng)脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的能力，提高血清溶血素的濃度。 (7)小鼠全身接受5 Gyγ射線照射后，小鼠巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞功能明顯受損。GHPS 能夠提高輻射損傷小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能和產(chǎn)生IL-1的能力，增強(qiáng)NK 細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的能力。 3．粗江蘺多糖對輻射損傷小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)機(jī)制 輻射損傷后免疫細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>、NO、c