哮喘小鼠氣道重塑過程中CD4+CD25+調節(jié)性T細胞和Th17細胞表達的動態(tài)變化及相關機制研究.pdf

1、目的:測定氣道重塑哮喘小鼠Th17細胞、CD4+CD25+Treg調節(jié)性T細胞在脾組織中表達水平及TGF-β1、smad2、smad7蛋白在肺組織中表達情況，分析他們變化的規(guī)律及其與氣道重塑的關系;Th17細胞、 CD4+CD25+Treg調節(jié)性T細胞與肺組織中TGF-β1、smad2、smad7蛋白表達的相互關系，探討哮喘氣道重塑發(fā)生過程中的免疫紊亂機制為臨床進一步研究哮喘更好的防治措施提供實驗室依據(jù)。
　　方法:隨機選取SPF

2、級雌性Balb/c小鼠48只，按隨機數(shù)字表法隨機分為兩組，模型組在0、14天每只小鼠腹腔注射雞卵清蛋白和氫氧化鋁混懸液0.2ML致敏，而空白對照組給予等量的生理鹽水腹腔注射致敏，至第21天開始模型組給予5％雞卵清蛋白混懸液霧化激發(fā)，約30分鐘，隔天一次;空白對照組給予等量的生理鹽水霧化激發(fā)。兩組分別在霧化2周、4周及8周后的24小時內每組隨機處死小鼠8只取左肺及脾組織備用，肺組織石蠟切片HE染色觀察肺組織氣道重塑程度;應用免疫組化法測T

3、GF-β1、smad2、smad7蛋白在肺組織中的表達情況;流式細胞儀測Th17、 CD4+CD25+Treg細胞占CD4+細胞的百分比在脾組織中的動態(tài)變化。
　　結果:
　　(1)小鼠經OVA霧化激發(fā)后會出現(xiàn)一系列哮喘急性發(fā)作的癥狀如:煩躁不安或少動、騷鼻子、口唇發(fā)紺、呼吸增快或呼吸困難、毛發(fā)豎起、腹肌痙攣、點頭呼吸、二便失禁等。病理學可見各組哮喘模型組支氣管壁及血管周圍大量炎癥細胞浸潤，部分細支氣管上皮細胞脫落不全，基底

4、膜增厚，平滑肌細胞增生肥大，杯狀細胞增生;激發(fā)2周后模型組支氣管總管壁的面積(Wat/P bm)開始增厚(P＜0.01)4周增厚明顯、8周增厚最為顯著(p＜0.01);激發(fā)4周后模型組支氣管平滑肌面積(Wam/Pbm)開始增加(P＜0.01)，8周增加最為顯著(P＜0.01)。
　　(2)隨著激發(fā)時間的延長小鼠脾組織細胞懸液中Th17細胞數(shù)水平在逐漸升高，與哮喘氣道重塑的程度呈正相關(p＜0.01);而隨著激發(fā)時間的延長小鼠脾組織

5、細胞懸液中CD4+CD25+Treg細胞數(shù)水平在逐漸降低，與哮喘氣道重塑程度均呈負相關(p＜0.01)。
　　(3)小鼠肺組織免疫組化染色中smad2、smad7、TGF-β1蛋白陽性表達為淺黃色或棕黃色，主要表達在細胞漿、細胞膜和間質。smad2蛋白表達的光密度值較空白對照組增加明顯(P＜0.01)，且隨激發(fā)時間的延長在逐漸增加，與哮喘氣道重塑的嚴重程度呈現(xiàn)正相關(p＜0.01); smad7蛋白表達的光密度值水平較空白對照組明

6、顯降低，且隨激發(fā)時間的延長逐漸降低與哮喘氣道重塑程度呈負相關(p＜0.05);TGF-β1蛋白表達的光密度值水平隨激發(fā)時間的延長變化不明顯，但較其空白對照組顯著升高(P＜0.01)。
　　(4)哮喘2w組、4w組、8w組小鼠脾臟單核細胞懸液中Th17數(shù)與小鼠肺組織中smad2蛋白表達均呈現(xiàn)正相關，與smad7蛋白表達呈現(xiàn)負相關，與TGF-β1蛋白表達呈現(xiàn)正相關;哮喘2w組、4w組、8w組小鼠脾臟單核細胞懸液中CD4+CD25+Tr

7、eg細胞數(shù)與小鼠肺組織中smad2蛋白表達均呈現(xiàn)負相關，與smad7蛋白表達呈現(xiàn)正相關，與TGF-β1蛋白表達呈現(xiàn)負相關。
　　結論:
　　1.哮喘小鼠氣道重塑的改變是動態(tài)改變過程，激發(fā)的時間越長，哮喘氣道重塑越嚴重。
　　2.發(fā)生氣道重塑的哮喘小鼠存在TH17細胞及CD4+CD25+Treg細胞的表達異常， TH17細胞與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關，而CD4+CD25+Tregreg細胞及CD4+CD25+Treg/TH

8、17與氣道重塑程度呈現(xiàn)負相關，即激發(fā)時間越長，TH17細胞表達升高越明顯，CD4+CD25+Treg細胞數(shù)目降低越明顯，氣道重塑的程度越嚴重，兩者間免疫失衡可能是哮喘氣道重塑發(fā)生的重要因素之一。
　　3.哮喘氣道重塑小鼠存在TGF-β1及smads蛋白的表達異常。smad2與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關，而smad7與氣道重塑程度呈現(xiàn)負相關，TGF-β1與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關;激發(fā)時間越長，smad2蛋白表達升高越明顯，smad7蛋白