人CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞體外擴(kuò)增研究.pdf

1、目的：建立有效的體外培養(yǎng)擴(kuò)增人CD4+CD25+Treg細(xì)胞的體系，為臨床輸注供者來(lái)源的CD4+CD25+細(xì)胞抑制急性移植物抗宿主病(aucte graft versus hostdisease，aGVHD)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：用免疫磁珠分選法從健康人外周血淋巴細(xì)胞中得到CD4+T細(xì)胞，CD4+CD25-T細(xì)胞，CD4+CD25+Treg細(xì)胞。分別進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)、擴(kuò)增；流式分析其表型及FOXP3表達(dá)，MTT法檢測(cè)體外擴(kuò)增的

2、CD4+CD25+Treg對(duì)自體和異體的CD4+T細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　 結(jié)果：經(jīng)過(guò)3周培養(yǎng)，三組細(xì)胞均有明顯的擴(kuò)增。磁珠分選后的CD4+CD25+Treg細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)為20±8，細(xì)胞純度89.28％±2.43％下降到76.36％±2.38％。CD4+CD25-T細(xì)胞組擴(kuò)增迅速，倍數(shù)為110±21倍，并且CD4+CD25+Treg細(xì)胞的比例由培養(yǎng)前0.55％±0.27％增加到53.73％±3.81％。CD4+T細(xì)胞組擴(kuò)增倍

3、數(shù)為89±8倍，并且CD4+CD25+Treg細(xì)胞的比例由10.63％±3.87％增加到70.93％±1.71％。體外抑制實(shí)驗(yàn)顯示體外擴(kuò)增的CD4+CD25+T細(xì)胞對(duì)自體和異體的CD4+T細(xì)胞增殖均有明顯的抑制作用，并且隨著效靶比濃度的降低而降低。而且其各濃度梯度的抑制作用在自體和異體之間無(wú)明顯的差異。
　　 結(jié)論：我們?cè)隗w外成功擴(kuò)增了CD4+CD25+Treg細(xì)胞，并且具有免疫抑制功能，其中CD4+T細(xì)胞組擴(kuò)增倍數(shù)大，細(xì)胞數(shù)量