AIHA-Evans綜合征外周血淋巴細(xì)胞CD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 目前，自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）/Evans綜合征的確切病因和發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，復(fù)發(fā)率及病死率仍較高，給家庭和社會(huì)均造成較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。即使經(jīng)過治療方法的改進(jìn)，采用腎上腺皮質(zhì)激素、免疫抑制劑甚至脾切除治療AIHA/Evans綜合征，但仍有反復(fù)發(fā)作者，此類病例療效差，病程僅數(shù)月至數(shù)年不等，病死率高。這提示仍有其他免疫異常機(jī)制在該病的發(fā)病過程中

2、起作用，且未被發(fā)現(xiàn)和缺乏相應(yīng)的治療措施。
　　 日益增多的證據(jù)顯示包括T細(xì)胞亞群功能失衡和共刺激分子表達(dá)異常等細(xì)胞免疫異常機(jī)制在自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)中起重要作用。目前，已有大量證據(jù)論證了CD80和CD86共刺激因子控制體液免疫和細(xì)胞免疫的重要性。同時(shí)，也有大量的文獻(xiàn)認(rèn)為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在誘導(dǎo)和維持外周自身免疫耐受中至關(guān)重要的作用，在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。有文

3、獻(xiàn)報(bào)道在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生長和動(dòng)態(tài)平衡中，CD80和CD86起了重要的作用;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞從抗原提呈細(xì)胞中獲得CD86后能提高它們的抑制作用。Mqadmi等應(yīng)用CD25單克隆抗體處理C57/B16小鼠去除其體內(nèi)的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，然后將異體紅細(xì)胞注入C57/B16小鼠的腹腔，制成小鼠的AIHA模型，發(fā)現(xiàn)缺失CD25的C57/B16小鼠AIHA的發(fā)生率從30％升至90％，將從小鼠脾臟純化的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞注入小鼠體

4、內(nèi)，可以阻止自身抗體的產(chǎn)生，減輕溶血的發(fā)作，而注入CD4+CD25-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，沒有此作用，從而在動(dòng)物模型中證明了CD4+D25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在AIHA的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。而隨后我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)AIHA發(fā)作患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例明顯減少，之后我們研究外周血淋巴細(xì)胞共刺激分子CD80、CD86在AIHA/Evans綜合征患者中存在異常。而共同研究共刺激分子CD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與AI

5、HA或Evans綜合征的文獻(xiàn)卻較少見。如果我們繼續(xù)深入研究AIHA/Evans綜合征的免疫異常機(jī)制，將很可能揭示新的免疫異常機(jī)制并因而發(fā)現(xiàn)新的治療措施，提高治療水平，從而降低復(fù)發(fā)率和病死率，造?；颊吆蜕鐣?huì)，具有較大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義。
　　 研究方法:
　　 1.選取汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬粵北人民醫(yī)院2010年4月～2013年2月期間診治的初發(fā)AIHA或Evans綜合征患者24例次為發(fā)作組，其中男6人共7例次，女12人17例次

6、，AIHA18例次，均為溫抗體型AIHA患者，Evans綜合征6例次，中位年齡49歲（18～74歲）;11例次同期診治的AIHA/Evans綜合征治療后部分緩解或完全緩解者為緩解組，其中男性2人共3例次，女性8人8例次，中位年齡44歲（18～72歲）;27人27例次均為同期體檢健康者為正常對(duì)照組，均無腫瘤或自身免疫性疾病病史，其中男10例次，女17例次，中位年齡51歲（19～72歲）。
　　 2.對(duì)各組標(biāo)本進(jìn)行外周血活細(xì)胞免疫熒

7、光標(biāo)記，使用FACS-Calibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)人PBLsCD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。檢測(cè)結(jié)果分別以PBLsCD80、CD86占PBLs的百分率和PBLsCD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占PBLs的百分率表示。
　　 3.統(tǒng)計(jì)方法:以SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.根據(jù)本研究所得出的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，結(jié)合國內(nèi)外文獻(xiàn)探討

8、AIHA/Evans綜合征的發(fā)病機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組、緩解組和正常對(duì)照組PBLsCD80表達(dá)水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為（6.59±7.67）％VS（4.20±5.89）％(P＞0.05)，（4.51±2.83）％ VS(4.20±5.89)％(P＞0.05)。
　　 2.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs共刺激因子CD86表達(dá)水平較正常對(duì)照組升高（5.90±4.

9、82）％VS（2.69±1.35）％(P＜0.05)，而緩解組與正常對(duì)照組PBLsCD86表達(dá)水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（5.54±5.88）％VS（2.69±1.35）％(P＞0.05)。
　　 3.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLsCD4+T細(xì)胞表達(dá)水平較正常對(duì)照組明顯下降（25.63±12.01）％VS（36.44±7.76）％(P＜0.01)，而緩解組與正常對(duì)照組PBLsCD4+T細(xì)胞表達(dá)水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（29.08

10、±12.29）％VS(36.44±7.76)％(P＞0.05)。
　　 4.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLsCD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平較正常對(duì)照組及治療后緩解組明顯下降，（2.91±2.28）％VS（5.86±2.28）％(P＜0.01)，(2.89±2.30)％VS(5.37±3.91)％(P＜0.01)。
　　 5.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs的CD80、CD86表達(dá)水平分別與CD4+

11、CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平均無明顯相關(guān)性（P均＞0.05）。
　　 6.PBLs的CD80、CD86、CD4+和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)水平分別與性別、年齡、血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比、總膽紅素、間接膽紅素均無明顯相關(guān)性（P均＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AIHA/Evans綜合征發(fā)作組、治療后緩解組及正常對(duì)照組發(fā)現(xiàn):AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs的

12、CD86表達(dá)水平較正常對(duì)照組明顯升高，而PBLs的CD4+T細(xì)胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平較正常對(duì)照組卻明顯降低;正常對(duì)照組與緩解組PBLs的CD86、CD4+T細(xì)胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且治療后緩解組較發(fā)作組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平明顯上升。本研究結(jié)果提示AIHA/Evans綜合征發(fā)病時(shí)PBLs的CD86、CD4+T細(xì)胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平同時(shí)存在異常

13、，可能參與了AIHA/Evans綜合征發(fā)病時(shí)的免疫異常機(jī)制。
　　 2.AIHA/Evans綜合征發(fā)病時(shí)PBLs的CD80、CD86表達(dá)水平分別與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平均無明顯相關(guān)性。
　　 3.PBLs CD80、CD86、CD4+和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平與性別、年齡、血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比、總膽紅素、間接膽紅素的均無相關(guān)性，提示上述指標(biāo)表達(dá)水平不能反映AIHA/Evans綜合征