Leber遺傳性視神經(jīng)病變的分子生物學(xué)檢測.pdf

1、該研究在對5個LHON家系調(diào)查的基礎(chǔ)上,采用聚合酶鏈反應(yīng)擴增結(jié)合單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)和DNA測序,對三個家系的30個母系成員的血樣進行了11個位點的分子生物學(xué)檢測,目的是研究LHON的發(fā)病特點及分子生物學(xué)改變;為LHON的診斷、治療、發(fā)病機制的研究提供參考依據(jù);早日確診疑似病人,使其避免不必要的治療;為病人及其家系成員的就業(yè)、婚育作出指導(dǎo);材料與方法共調(diào)查了河南、安徽兩省5個符合臨床診斷的LHON家系,其中三個家系同意

2、檢測,在這三個家系中抽取了母系成員的血樣30份作為實驗組,抽取無視力障礙的正常人血樣32份作為對照組,兩組的男女比例(x<'2>=0.06,p=0.81)及年齡分布(t=0.72,p=0.47)相匹配.在無菌條件下抽取外周靜脈血,2﹪EDTA抗凝,有機酚法提取DNA.752紫外線分光光度計進行DNA定量及純度測定,用4對引物聚合酶鏈反應(yīng)擴增出4個線粒體DNA片斷,涵蓋3394、3460、4136、4160、4216、11696、1177

3、8、14459、14482、14484、14498共11個突變位點,瓊脂糖凝膠電泳驗證DNA擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度.擴增產(chǎn)物用于單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析和DNA測序(DNA sequencing).該實驗的參照mtDNA序列是劍橋標(biāo)準(zhǔn)mtDNA序列.結(jié)論(1)LHON患者發(fā)病年齡隨傳遞代數(shù)的增加而提前,可能具有遺傳早發(fā)現(xiàn)象.(2)綜合國內(nèi)的文獻資料和我們的研究結(jié)果,中國LHON患者以攜帶11778點突變占絕大多數(shù),11778位點突變的檢測應(yīng)作為

4、診斷LHON的常規(guī)檢測.(3)SSCP分析和測序相結(jié)合是目前LHON檢測的較理想的方法.(4)三個家系有共同的突變位點,但只有部分發(fā)病,其中已發(fā)病者可確診為LHON患,未發(fā)病的母系成員為該病的攜帶者.(5)測序中發(fā)現(xiàn)的4164位點突變,是該病新的繼發(fā)突變位點?還是氨基酸水平的多態(tài)性?尚需進一步研究才能定論.(6)與劍橋標(biāo)準(zhǔn)mtDNA序列比對,該研究實驗組和對照組所有樣本均出現(xiàn)11719位點突變,此突變是該病所引起的繼發(fā)突變?還是中國人群