生防菌株E26防治葡萄根癌病的一個(gè)相關(guān)基因的克隆及分析.pdf

1、葡萄根癌病是由葡萄土壤桿菌(Agrobacteriumvitis)引起的一種世界性病害，在生產(chǎn)上造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。以前的研究表明，本實(shí)驗(yàn)室的葡萄土壤桿菌E26菌株(A.vitis)無致病性，是一株很有應(yīng)用前景的根癌病生防菌株。 突變株M27是一株Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入E26野生型菌株的突變株，沒有喪失產(chǎn)土壤細(xì)菌素的能力，而生防能力下降。通過初步檢測突變株M27的部分生理生化性狀以及生防能力下降的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)突變株M2

2、7與E26野生型菌株反應(yīng)一致。利用質(zhì)粒拯救的方法，獲得Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子的側(cè)翼序列，設(shè)計(jì)引物PCR篩選E26cosmid文庫，篩選得到一個(gè)陽性粘粒p1136。繼而亞克隆互補(bǔ)片斷，針刺接種向日葵苗初步得到可以互補(bǔ)突變株M27生防能力的功能片斷H2。根據(jù)H2的測序結(jié)果，結(jié)合ORF分析以及BlastX比對(duì)結(jié)果，獲得完整的功能基因序列，通過缺失突變和互補(bǔ)試驗(yàn)確定，得到EysR。EysR是一個(gè)屬于LysR類型的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白(LTTR)，對(duì)E2