產(chǎn)酶溶桿菌OH11菌株生防相關(guān)基因的克隆與表達(dá).pdf

1、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上由真菌、細(xì)菌、線蟲(chóng)引起的植物病害的防治一直是非常重要的環(huán)節(jié)。多數(shù)病害的防治主要依賴(lài)于化學(xué)農(nóng)藥的使用，但化學(xué)農(nóng)藥的大量使用容易對(duì)環(huán)境造成污染，危害人畜健康，同時(shí)造成病原茵抗性不斷上升。而生物防治對(duì)人畜安全，對(duì)環(huán)境污染極少，有時(shí)對(duì)某些有害生物可以達(dá)到長(zhǎng)期抑制的作用，使用方便，便于利用，近年來(lái)受到了廣大的關(guān)注。 產(chǎn)酶溶桿菌OH11菌株是從土壤中分離的一個(gè)生防菌株，革蘭氏陰性茵，對(duì)由真菌、細(xì)菌引起的許多病害都有生防作用。它GC

2、含量高，有滑移性，能產(chǎn)生許多胞外水解酶，如幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶、a-水解蛋白酶等，而酶的水解活性一直是生防菌株生防機(jī)制的重要研究?jī)?nèi)容之一。 本研究根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的產(chǎn)酶溶桿菌生防基因的核酸序列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)引物，從產(chǎn)酶溶桿菌OHll菌株基因組DNA中擴(kuò)增出幾丁質(zhì)酶基因(chiA基因)、β-1，3-葡聚糖酶基因(gluA基因和gluC基因)和a-水解蛋白酶基因(a-lytic protease基因)，并克隆到表達(dá)載體pET2

3、1a(+)或pET30a(+)上。挑選陽(yáng)性克隆，分別命名為BLChiA、BLGluA、BLGluC、BLaLP并測(cè)序。測(cè)序后發(fā)現(xiàn)OH11菌株中chiA基因與C3菌株和N4-7菌株的chiA基因在氨基酸水平上分別有97.24％和95.93％的同源性，96.85％和95.74％的相似性。β-1，3-葡聚糖酶基因中g(shù)luA基因與C3菌株和N4-7菌株的gluA基因在氨基酸水平上分別有98.06％和94.57％的同源性，96.77％和94.57

4、％的相似性；gluC基因與C3菌株和N4-7菌株的gluC基因在氨基酸水平上分別有97.42％和96.12％的同源性，96.99％和95％的相似性。a-水解蛋白酶基因與菌株ATCC 29487和菌株ATCC 29478的 a-水解蛋白酶基因在氨基酸水平上分別有90.77％和91.02％的同源性，92.93％和92.68％的相似性。將表達(dá)菌株大量培養(yǎng)，IPTG誘導(dǎo)后進(jìn)行15％SDS-PAGE檢測(cè)，壓力破碎細(xì)胞后用Ni<'2+>柱純化蛋白，