家蠶蛾溶繭酶的純化及其基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、溶繭酶是蠶蛾在羽化的過(guò)程中分泌的一種蛋白水解酶，用于水解、軟化繭的先端，以便于羽化后的蠶蛾脫繭而出。作為溶繭酶天然底物的蠶絲蛋白是一種優(yōu)良的高分子材料，在多種領(lǐng)域有著廣泛的用途，特別是把絲蛋白水解成水溶性的由特殊氨基酸組成的小分子生物活性肽，在醫(yī)療衛(wèi)生和日用化妝品領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值。因此，研究家蠶蛾溶繭酶，不僅對(duì)蠶蛾脫繭而出這一生理過(guò)程的認(rèn)識(shí)具有重要的理論意義，而且對(duì)蠶絲蛋白的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用也將產(chǎn)生積極的影響。迄今，前輩學(xué)者已對(duì)結(jié)殼

2、于柞蠶蛾和天蠶蛾下顎表面的溶繭酶結(jié)晶顆粒的酶學(xué)性質(zhì)做了較為詳細(xì)的研究。然而有關(guān)家蠶蛾溶繭酶的分離純化與酶學(xué)性質(zhì)的研究，以及包括柞蠶蛾和天蠶蛾在內(nèi)的溶繭酶基因克隆與表達(dá)的研究至今未見(jiàn)報(bào)道。 本研究首先論證了家蠶蛾嗉囊不分泌溶繭酶；然后，分別從中腸與下顎組織蛋白中分離純化出中腸溶繭酶與下顎溶繭酶。并對(duì)下顎溶繭酶基因進(jìn)行了克隆與表達(dá)。此外，對(duì)傳統(tǒng)的親和層析方法做了改進(jìn)，應(yīng)用改進(jìn)的親和層析方法從中腸組織蛋白中分離純化出另外一種絲氨酸蛋白

3、酶。 主要研究結(jié)論如下：前輩學(xué)者的研究結(jié)果表明，家蠶蛾溶繭酶的可能來(lái)源是下顎、嗉囊和中腸，但三者是否具有分泌溶繭酶的能力至今缺乏足夠詳細(xì)的證據(jù)。本研究對(duì)家蠶蛾下顎、嗉囊和中腸的組織結(jié)構(gòu)分別作了光學(xué)顯微鏡和透射電鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)嗉囊不具備分泌器官的形態(tài)特征，僅是由壁薄的膜圍成的囊狀結(jié)構(gòu)，沒(méi)有觀察到分泌細(xì)胞及其分泌物。而下顎和中腸具有分泌細(xì)胞，而且存在大量的分泌物質(zhì)。對(duì)蛾吐出液進(jìn)行酶活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)蛾吐出液除具有酯酶活力外，還具有纖溶酶