一種新型生防菌菌株OH11的鑒定和生防效果研究.pdf

1、從作物根際土壤中分離到1056株細(xì)菌，篩選出7個(gè)對(duì)辣椒疫霉病菌、瓜果腐霉病菌、甘薯軟腐病菌、油菜菌核病菌、水稻紋枯病菌、棉花枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、茄根腐病菌、棉花黃萎病菌、番茄青枯病菌、甘藍(lán)黑腐病菌、水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病菌、馬鈴薯環(huán)腐病菌等重要植物病原菌具有較強(qiáng)拮抗作用的菌株。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察和16S rDNA序列分析，BOH3為熒光假單胞菌，BOH2、BOH5、BOH46、BOH108、BOH116為5種不同的芽孢桿菌，OH

2、11為目前國(guó)內(nèi)尚未報(bào)道的一種新型生防菌。 OH11分離自菜園土。革蘭氏染色反應(yīng)陰性，茵體桿狀，無(wú)鞭毛，透射電鏡觀察，茵體0.4×1～6μm，長(zhǎng)度隨茵齡大小有變化。TSA平板上菌落顏色淺黃色至黃褐色，透明至半透明，產(chǎn)生可溶性褐色色素，菌齡越老色素產(chǎn)生越多。菌落圓形至不規(guī)則形，邊緣光滑或嚙齒狀，菌落邊緣可見(jiàn)稀薄擴(kuò)散邊緣，輪廓清晰，即滑行運(yùn)動(dòng)，液體培養(yǎng)粘質(zhì)。菌株生長(zhǎng)溫度5-35℃，最適生長(zhǎng)溫度為28-30℃。 Biolog和其

3、它生理生化試驗(yàn)結(jié)果表明：OH11能很好地利用D-纖維二糖、a-D-乳糖和蔗糖，且利用效果較L.enzymogenes ATCC29487標(biāo)準(zhǔn)菌株更好。具有脂酶活性，可以水解吐溫20，具有很強(qiáng)的蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性，可以水解羧甲基纖維素和明膠，不能水解淀粉和纖維素，可以利用檸檬酸鹽為唯一碳源，不能利用尿素為唯一氮源。0.1％十二烷基硫酸鈉(SLS)對(duì)菌株生長(zhǎng)具有抑制作用，所測(cè)抗生素中，僅對(duì)氯霉素(30μg／ml)敏感，對(duì)其它如鏈霉素、卡那

4、霉素、四環(huán)素等抗生素均具有較高的耐受水平，溶血試驗(yàn)為β-溶血作用，MacConkey和EMB培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，測(cè)定OH11的G+C含量為69.8 mol％。 脂肪酸分析表明OH11與L.enzymogenes ATCC29487的脂肪酸組分與比率有很多相似，六種主要脂肪酸11:0 iso、11:0 iso 30H、15:0 iso、16:0、17:0 iso和is0 7:1 w9c均占菌體總脂肪酸含量的70％以上。16S rD

5、NA序列同源性分析表明OHll與L.enzymogenes菌株DSM2043<'T>的同源性達(dá)99％，與L.enzymogenes C3菌株的同源性高達(dá)100％。 通過(guò)表形特征、生理生化測(cè)定、脂肪酸分析和16S rDNA序列分析，確定OH11為產(chǎn)酶溶桿菌(Lysobacter enzymogenes)，屬于變形菌門(proteobacteria)，γ-變形菌綱(γ-proteobacteria)，黃單胞菌目(Xanthomona

6、dales)，黃單胞菌科(Xanthomonadaceae)、溶桿菌屬(Lysobacter)。 在確定了OH11分類地位的基礎(chǔ)上，對(duì)OH11的防治效果進(jìn)行了初步研究，明確了菌株OH11代謝產(chǎn)物達(dá)到最高拮抗活性的最適條件為溫度30℃，起始pH值7.5，且代謝產(chǎn)物活性趨于最高的時(shí)間在菌體生長(zhǎng)趨于最大值24h之后。OH11主要通過(guò)分泌代謝產(chǎn)物，抑制茵絲的正常生長(zhǎng)、分生孢子的萌發(fā)及芽管的生長(zhǎng)，OH11菌體和代謝產(chǎn)物對(duì)線蟲也有一定的抑制