岡田酸誘導(dǎo)細(xì)胞實驗性阿爾茨海默病發(fā)生中PTEN的變化.pdf

1、目的：以細(xì)胞形態(tài)改變和tau蛋白過度磷酸化為反映AD(Alzheimer's Disease)發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵指標(biāo)，初步探明實驗性AD誘導(dǎo)產(chǎn)生過程中的P17EN變化狀況及其與tau蛋白過度磷酸化的關(guān)系，以深化理解AD的發(fā)病機制。 方法：①采用岡田酸(Okadaic acid，OA)誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞和NG108-15細(xì)胞，以細(xì)胞形態(tài)改變和tau蛋白過度磷酸化為觀察指標(biāo)，建立用于AD研究的細(xì)胞模型。②倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化

2、。③Western blot法測定SH-SY5Y細(xì)胞和NG108-15細(xì)胞Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④RT-PcR方法觀測SH-SY5Y細(xì)胞PTEN mRNA水平。 結(jié)果：1-岡田酸誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展中PTEN的變化：①OA孵育SH-SY5Y細(xì)胞可顯著改變細(xì)胞的形態(tài)，隨OA孵育時間的延長，6 h后細(xì)胞開始變圓，突觸縮回，18 h后細(xì)胞大部分變圓，突觸消失，48 h后細(xì)胞漂浮生

3、長，部分細(xì)胞呈死亡狀態(tài)；40：nmol/LOA作用于細(xì)胞，Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后12 h顯著升高， 18 h、24 h達(dá)高峰，之后下降，48h顯著降低。提示OA可誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行性損傷變性和tau蛋白過度磷酸化。②40 nmol/L OA孵育SH．SY5Y細(xì)胞，同時觀測細(xì)胞中Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平隨OA作用時間的變化，可見Ser<'396>位點磷酸化tau蛋

4、白水平變化同上，而PTEN蛋白水平則于3 h、6 h顯著升高，6 h達(dá)高峰，之后下降，48 h顯著降低。提示在OA誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展過程中，PTEN蛋白水平呈先升高后降低的變化。③40nmol/L OA作用于SH-SY5Y細(xì)胞，PTEN mRNA水平于12 h、18 h、24 h顯著升高，其它時間點未見明顯變化，提示在OA誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展過程中，PTEN mRNA水平存在著變化。2．岡田酸誘導(dǎo)NG1

5、08-15細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展中．PTEN的變化：①OA孵育NG108-15細(xì)胞，隨OA孵育時間的延長，6 h后細(xì)胞未見明顯變化，18 h后細(xì)胞變圓，開始貼壁不牢，48 h后細(xì)胞呈懸浮生長，但胞壁完整；20 nmol/L OA作用于細(xì)胞，Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后6 h開始顯著升高，18 h達(dá)高峰，48 h仍然顯著升高。提示隨OA孵育時間的延長，NG108-15細(xì)胞可發(fā)生進(jìn)行性損傷變性，但由于孵育時間不夠長，細(xì)

6、胞并沒有開始壞死；OA可誘導(dǎo)NG108-15細(xì)胞tau蛋白過度磷酸化。②20 nmol/L OA孵育NG108-15細(xì)胞，同時觀測細(xì)胞中Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。隨OA作用時間的變化，可見Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平變化同上， PTEN蛋白水平則于12 h、18 h、24 h顯著升高，18 h達(dá)高峰，其余時間點未見顯著變化，提示在OA誘導(dǎo)NG108-15細(xì)胞AD樣發(fā)生過程中，PTEN蛋白