膀胱移行細(xì)胞癌潛在生物標(biāo)記物探索——1，膀胱移行細(xì)胞癌p16基因甲基化研究——2，膀胱移行細(xì)胞癌差異表達(dá)microRNA研究.pdf

1、膀胱癌是國(guó)人泌尿系統(tǒng)中最常見(jiàn)的腫瘤，其中超過(guò)90％為移行細(xì)胞癌。目前，膀胱移行細(xì)胞癌診斷主要依賴于膀胱鏡檢結(jié)合病理學(xué)檢查。然而膀胱鏡檢為有創(chuàng)檢查，而且組織病理學(xué)對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌進(jìn)行的分期或分級(jí)難于早期地準(zhǔn)確預(yù)測(cè)大多數(shù)膀胱移行細(xì)胞癌的預(yù)后情況。因此尋找新的生物標(biāo)記物以用于膀胱移行細(xì)胞癌的早期診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和判斷預(yù)后已成為一個(gè)研究熱點(diǎn)問(wèn)題。近年來(lái)研究表明，腫瘤中常出現(xiàn)表觀遺傳性狀改變和微小核糖核酸(microRNA，miRNA)表達(dá)異常，它

2、們成為腫瘤診斷、治療有效的潛在靶點(diǎn)，但目前在膀胱移行細(xì)胞癌中的研究尚處于探索階段。為此，本論文對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌表觀遺傳性狀的改變以及microRNA差異表達(dá)兩方面內(nèi)容進(jìn)行探討，期以尋找診斷與治療膀胱腫瘤新的靶點(diǎn)。
　　 表觀遺傳修飾改變是指基因表達(dá)或蛋白表達(dá)發(fā)生改變而基因型未發(fā)生變化，同時(shí)又可以通過(guò)細(xì)胞分裂和增殖而穩(wěn)定遺傳的現(xiàn)象，主要包括DNA甲基化，組蛋白修飾等，其中DNA甲基化是目前研究得最清楚，也是最重要的表觀遺傳修飾形式

3、。研究表明，許多膀胱移行細(xì)胞癌中出現(xiàn)抑癌基因DNA啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生超甲基化，從而導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)沉默，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。這些DNA甲基化修飾的改變?yōu)榘螂滓菩屑?xì)胞癌診斷提供潛在靶標(biāo)。p16基因是一重要的抑癌基因，近來(lái)研究結(jié)果也表明一些膀胱移行細(xì)胞癌中p16基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生高甲基化，提示p16基因表觀遺傳改變可能是膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的重要原因之一，但目前尚缺乏對(duì)國(guó)人膀胱移行細(xì)胞癌患者p16基因甲基化系統(tǒng)性的研究。為此，本論文第一部分采用甲基化特

4、異性的PCR法系統(tǒng)檢測(cè)了35例膀胱移行細(xì)胞癌癌組織及與其相匹配的尿液標(biāo)本中p16基因啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島的甲基化狀態(tài)，探討國(guó)人膀胱移行細(xì)胞癌患者中p16基因甲基化情況，并探討尿液細(xì)胞沉渣標(biāo)本中p16基因甲基化在膀胱移行細(xì)胞癌診斷，尤其是非浸潤(rùn)性膀胱癌早期診斷中的臨床意義。
　　 最近研究發(fā)現(xiàn)microRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。microRNA通過(guò)不完全匹配的方式與mRNA結(jié)合，使目的mRNA降解或抑制目標(biāo)mRNA的翻譯

5、，從而實(shí)現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因表達(dá)。研究報(bào)道許多腫瘤組織/細(xì)胞中單個(gè)microRNA或microRNA表達(dá)譜發(fā)生顯著改變，這些microRNA很可能成為腫瘤診斷、治療極具潛力的新的靶點(diǎn)。明確膀胱移行細(xì)胞癌中特異表達(dá)的microRNA或microRNA譜并揭示差異表達(dá)的microRNA的生物學(xué)功能將有助于對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，并可能為膀胱移行細(xì)胞癌診斷提供新的生物標(biāo)記物，然而目前microRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)情況及其在

6、膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究尚處于探索階段。為此，本論文第二部分選擇7例處于不同分期、分級(jí)的膀胱移行細(xì)胞癌患者的癌組織，分別以自身健康膀胱組織為對(duì)照，利用microRNA芯片的方法系統(tǒng)研究了膀胱移行細(xì)胞癌組織差異表達(dá)的microRNA。
　　 小結(jié)：
　　 1.本研究發(fā)現(xiàn)，膀胱移行細(xì)胞癌患者癌組織中抑癌基因p/6基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化達(dá)51.4％，導(dǎo)致了p16基因轉(zhuǎn)錄沉默、推測(cè)由此引致膀胱癌的發(fā)生。研究結(jié)果還表明，抑

7、癌基因p16的高甲基化與患者年齡、性別、腫瘤的分級(jí)分期無(wú)相關(guān)性。
　　 2.本研究還發(fā)現(xiàn)，在非浸潤(rùn)性膀胱移行細(xì)胞癌患者中，尿液p16基因啟動(dòng)子區(qū)有50％出現(xiàn)高甲基化，提示這種檢測(cè)方法經(jīng)進(jìn)一步完善，有可能作為非浸潤(rùn)性膀胱移行細(xì)胞癌早期診斷的生物標(biāo)記物。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)，在3例T1期膀胱移行細(xì)胞癌患者中，其癌組織均有13個(gè)miRNA(miR-let-7a、7b、7c、7d、m1R-143、miR-199a*，miR-2

8、1、miR-24、miR-26a、miR-29c、miR-30a-5p，miR-30c和miR-30e-5p)的表達(dá)水平下調(diào)，同時(shí)有9個(gè)miRNA(miR-129、miR-141、 miR-494、miR-498、miR-500、miR-513和3個(gè)未命名的miRNA)共同表達(dá)上調(diào)，而在4例T2期膀胱移行細(xì)胞癌患者中，其癌組織中有4個(gè)miRNA(miR-26a、miR-29c、miR-30c和miR-30e-5p)共同表達(dá)下調(diào)，但沒(méi)有任

9、何1例miRNA共同表達(dá)上調(diào)，此結(jié)果表明：
　　 ①miR-26a、miR-29c、miR-30c和miR-30e-5p四個(gè)microRNA在所有檢測(cè)的患者的癌組織標(biāo)本中均表達(dá)下調(diào)，表明這四個(gè)miRNA的下調(diào)在膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生中扮演重要角色；
　　 ②上述四個(gè)miRNA的下調(diào)，若同疇合并有上述9個(gè)miRNA(miR-129、miR-141、 miR-494、miR-498、miR-500、miR-513和3個(gè)未命名的