細(xì)胞周期蛋白-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、喉癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤，在我國該病約占全身腫瘤的1％～5％，其病理類型以鱗狀細(xì)胞癌為主，占全部喉癌的93％～99％。我國北方地區(qū)喉癌的發(fā)病率較高，發(fā)病年齡50～60歲為最多，男性的發(fā)病率高于女性。近年來，隨著工業(yè)污染的加重，喉癌的發(fā)病率有明顯的上升趨勢。喉癌治療涉及手術(shù)、放射治療、抗腫瘤藥物治療和基因治療等綜合措施。隨著診斷和治療水平的不斷進(jìn)步，喉癌患者手術(shù)后喉功能保留率、生活質(zhì)量及5年生存率均有了較大的提高，但是晚期喉癌患者的治

2、療效果仍不盡如人意，局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍為喉癌患者術(shù)后5年內(nèi)死亡的主要原因。作為喉癌早期治療的微創(chuàng)手術(shù)，也要求對喉癌早期診斷和治療預(yù)后有正確的估計(jì)，以盡量減少創(chuàng)傷，保留患者的喉功能。因此，作為臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究的目的之一，探討與喉癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)因素，以期尋找一個有效的檢測指標(biāo)以協(xié)助診斷、盡早的區(qū)分其病理類型，了解病變的范圍以預(yù)測腫瘤的預(yù)后，有助于確定合理的治療方案和治療預(yù)期。
　　 喉腔黏膜的上皮細(xì)胞發(fā)生癌變的具體機(jī)制不明，可能與

3、吸煙、飲酒、環(huán)境污染、病毒感染等因素有關(guān)。隨著對細(xì)胞調(diào)控認(rèn)識的不斷深入，研究發(fā)現(xiàn):細(xì)胞周期的調(diào)控異常是癌癥發(fā)病的一個重要環(huán)節(jié)，細(xì)胞周期蛋白(Cyclins)作為細(xì)胞周期的正向調(diào)控因素，控制細(xì)胞周期的進(jìn)程，其表達(dá)水平具有細(xì)胞周期依賴性，是調(diào)節(jié)細(xì)胞活動的重要蛋白質(zhì)。Cyclins的異常表達(dá)是導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制受到破壞的主要因素之一，與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。Cyclins在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色日益成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，認(rèn)為:癌癥等惡

4、性腫瘤可能是一類細(xì)胞周期性疾病。
　　 Ki-67是增殖性細(xì)胞核的標(biāo)記物，代表細(xì)胞增殖水平，目前認(rèn)為:Ki-67的功能與細(xì)胞有絲分裂有關(guān)。分子生物學(xué)研究表明:細(xì)胞過度分裂與增殖是腫瘤惡變的重要環(huán)節(jié)。Ki-67在G1后期出現(xiàn)，S、G2期升高，M期達(dá)峰值，只參與增生細(xì)胞核反應(yīng)，于G0期消失，進(jìn)入G1期時(shí)開始表達(dá)至有絲分裂后迅速減少，到G0期則不表達(dá)。許多研究表明:Ki-67蛋白表達(dá)的精確調(diào)控、分布，與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后，

5、均具相關(guān)性，是細(xì)胞增殖、完成細(xì)胞周期所不可或缺的，是檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)，可作為腫瘤預(yù)后的經(jīng)典標(biāo)記物。Ki-67蛋白臨床檢測已被廣泛開展，但是在喉腫瘤預(yù)后及治療方面的研究應(yīng)用在近幾年才被逐漸報(bào)道。
　　 本研究通過檢測Cyclin-D1和Ki-67在喉鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織、喉腔正常鱗狀上皮組織中的表達(dá)情況，以期為喉癌的早期診斷和預(yù)后判斷提供一個可靠的分子生物學(xué)指標(biāo)。
　　 目的:
　　 初步探討細(xì)胞

6、周期蛋白D1和細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物Ki-67在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床、病理特征之間的關(guān)系，以及兩者在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性，以期為喉癌的早期診斷和預(yù)后判斷提供一個可靠的分子生物學(xué)指標(biāo)。
　　 方法:
　　 92例我院2000年1月至2005年8月期間收治的喉鱗狀細(xì)胞癌患者行根治性手術(shù)后所留取的標(biāo)本，其中男性78例，女性14例。年齡36～79歲，平均55.4歲。根據(jù)腫瘤原發(fā)部位分為:聲門上型43例，聲門型

7、46例，聲門下型3例;根據(jù)腫瘤分化程度:高分化(G1)25例;中分化(G2)19例;低分化(G3)48例;根據(jù)癌腫的生長范圍和擴(kuò)展的程度，按國際抗癌協(xié)會(UICC)2002年第6版公布的TNM分類分期方案如下:Ⅰ期6例;Ⅱ期15例;Ⅲ期46例;Ⅳ期25例。應(yīng)用免疫組化S-P法檢測Cyclin-D1和Ki-67的蛋白表達(dá)，以PBS代替一抗作為陰性對照，比較上述基因蛋白在正常喉部鱗狀組織（對照1組）、喉鱗狀細(xì)胞癌組織、喉癌旁組織（對照2組）

8、中的表達(dá)情況，探討Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達(dá)與患者臨床分期、病理特征之間的關(guān)系以及兩者之間的相關(guān)性。
　　 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。喉鱗狀細(xì)胞癌組織、喉腔正常鱗狀上皮組織（對照1組）、腫瘤旁組織（對照2組）之間比較，計(jì)量資料以((x)±s)表示，以one-way ANOVA方法進(jìn)行總體比較，t檢驗(yàn)做組間比較;Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系比較采用四

9、格表資料的x2檢驗(yàn)，Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達(dá)的相關(guān)性比較采用Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)顯著性水準(zhǔn)取α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)在92個腫瘤樣本中，有60例(65.2％)檢測到有細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，而在對照1組和2組中，檢出率分別為3％(3/100)和13.1％(12/92)，三組對于細(xì)胞周期蛋白D1的檢出率具有顯著性差異(P＜0.05)，而且

10、進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn):在不同分期的喉鱗狀細(xì)胞癌組織中，Cyclin-D1的表達(dá)與臨床分期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(P=0.029＜0.05)。然而，Cyclin-D1的表達(dá)和其他變量（性別、年齡、癌癥的階段、組織分化、解剖學(xué)部位、吸煙史、飲酒史）之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。
　　 (2)Ki-67免疫組化檢測:Ki-67陽性信號主要定位于細(xì)胞質(zhì)，為粗細(xì)不等的棕黃或棕褐色顆粒。正常喉部鱗狀細(xì)胞上皮組織中未見表達(dá)，喉癌旁組織中有4例(4.34％)呈弱

11、陽性表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn):Ki-67的過度表達(dá)與腫瘤患者的性別、年齡、解剖學(xué)部位、組織分化、吸煙史和飲酒史無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。但Ki-67蛋白表達(dá)與患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有顯著相關(guān)關(guān)系(P=0.025＜0.05)。
　　 (3)Ki-67蛋白的表達(dá)與患者的生存率無相關(guān)性，Ki-67蛋白的表達(dá)與生存時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)關(guān)系(P=0.457)。而Cyclin-D1蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與患者的生存率有明顯的相關(guān)關(guān)系(P=0.0004＜0.

12、05)。
　　 (4)在Ki-67陽性高表達(dá)的56例喉癌組織中，有41例出現(xiàn)Cyclin D1陽性高表達(dá);在Cyclin D1陽性低度表達(dá)的51例患者中，有36例出現(xiàn)Ki-67陽性低度表達(dá)，經(jīng)Spearman等級相關(guān)性檢驗(yàn)表明:兩者在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.620，P＜0.001)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)Cyclin D1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)率高，與患者的臨床分期及預(yù)后有顯著的

13、相關(guān)關(guān)系，Cyclin D1低表達(dá)者有較高的生存率，可作為喉鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后的監(jiān)測指標(biāo)，為喉鱗狀細(xì)胞癌的治療提供一個新的靶點(diǎn)。
　　 (2)Ki-67在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中亦有表達(dá)，與患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)，Ki-67高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高有顯著的相關(guān)關(guān)系，可作為喉鱗狀細(xì)胞癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測指標(biāo)。
　　 (3)Cyclin D1和Ki-67在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)具有顯著正相關(guān)關(guān)系，兩者聯(lián)合檢測對喉鱗狀細(xì)胞癌患者術(shù)