MPTP損傷對食蟹猴嗅球神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的:不同于傳統(tǒng)的限于運(yùn)動系統(tǒng)認(rèn)知,帕金森病更可以視為是以嗅覺障礙為主要癥狀而以運(yùn)動障礙為次要癥狀的疾病。作為嗅覺通路中重要樞紐的嗅球在該疾病中的病理改變亦被廣泛研究。MPTP非人靈長類帕金森病模型是迄今最理想的研究帕金森病發(fā)病機(jī)制的動物模型。
　　本研究旨在通過免疫組化的方法觀察食蟹猴嗅球神經(jīng)解剖和神經(jīng)化學(xué)的特征,包括:1.食蟹猴嗅球組織結(jié)構(gòu)學(xué)特點(diǎn);2.食蟹猴嗅球各主要神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)情況,膠質(zhì)細(xì)胞的分布;3.MPTP損傷對食

2、蟹猴嗅球神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá),膠質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞凋亡的影響,MPTP損傷對食蟹猴嗅球中各主要神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)、凋亡信號、膠質(zhì)細(xì)胞的影響,這些知識可以給研究帕金森病嗅覺障礙積累一定的背景知識。
　　第一部分:MPTP食蟹猴帕金森病模型的建立
　　方法:成年健康食蟹猴6只,在動物中心嚴(yán)格按照AAALAC(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care,

3、國際實(shí)驗(yàn)動物評估和認(rèn)可管理委員會)規(guī)定和要求對動物進(jìn)行日常的飼養(yǎng)、關(guān)懷和管理。采用小劑量連續(xù)給藥方法,即0.2mg/kg MPTP-HCl溶液,于下肢靜脈緩慢注入,每天早晨1次(9AM)。采用個體化原則,以出現(xiàn)典型的臨床癥狀為注射終點(diǎn)。
　　結(jié)果:注射MPTP后10~14(12.0±1.67)天,臨床評分達(dá)到10(10.5±0.55)分,此時(shí)所有實(shí)驗(yàn)猴均逐漸出現(xiàn)典型的運(yùn)動損害癥狀,包括運(yùn)動遲緩、隨意運(yùn)動活動減少、屈曲體態(tài)、姿勢步態(tài)

4、不穩(wěn),肌強(qiáng)直、間斷性僵直發(fā)作及姿勢性或靜止性震顫。在其后約1周的時(shí)間(開始注射MPTP后18.8±2.9天)臨床癥狀持續(xù)進(jìn)展并進(jìn)入相對穩(wěn)定期,此時(shí)臨床評分為(19.5±4.8)分。
　　第二部分:MPTP損傷對食蟹猴嗅球神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響
　　方法:摘取模型組和對照組食蟹猴嗅球后制成石蠟切片。我們首先選擇的抗體針對的抗原物質(zhì)為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、5-HT。兩種抗體分別染模型組和對照組各25張石蠟切片,再從25張食蟹猴嗅球石蠟

5、切片中隨機(jī)選取5張,選取視野,顯微鏡攝片,分析免疫組化圖片,測平均光密度,計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。
　　我們也選擇了氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)GABA和ChAT,研究方法同上。多巴胺系統(tǒng)與帕金森病頗具關(guān)聯(lián),這里我們除了研究 DA,還研究多巴胺通路上的信號分子受體和轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白,分別為DARPP32 D1R D2R DAT。
　　結(jié)果與對照組比較,MPTP組的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA和5-HT的陽性細(xì)胞數(shù)和陽性纖維量均減少。與對照組比較,MPTP組氨基酸

6、類神經(jīng)遞質(zhì)GABA的陽性細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞量均減少。與對照組比較,MPTP組ChAT陽性細(xì)胞數(shù)與陽性纖維量均減少。與對照組比較,MPTP組DARPP32 D1R D2R DAT陽性細(xì)胞數(shù)與陽性纖維量均減少,其中以DAT減少程度尤為顯著。
　　第三部分:MPTP損傷對食蟹猴嗅球膠質(zhì)細(xì)胞的影響
　　方法:以抗Iba1抗體、抗GFAP抗體、抗TNF-α抗體用SABC法染色,每組從25張食蟹猴嗅球石蠟切片中隨機(jī)選取5張,顯微鏡攝片,分

7、析免疫組化圖片,測平均光密度,計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。從而觀察MPTP損傷對食蟹猴嗅球膠質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　結(jié)果與對照組比較,MPTP組Iba1陽性物質(zhì)增多,提示小膠質(zhì)細(xì)胞有增殖。與對照組比較,MPTP組 GFAP陽性物質(zhì)增多,提示星形膠質(zhì)細(xì)胞有增殖。與對照組比較,MPTP組TNF-α陽性物質(zhì)增多,提示有炎性反應(yīng)。第四部分 MPTP損傷對食蟹猴嗅球細(xì)胞凋亡的影響方法用抗Bcl2和抗caspase3抗體以SABC法染色,每組從25張食蟹猴嗅球

8、石蠟切片中隨機(jī)選取5張,選取視野后顯微鏡攝片,分析免疫組化圖片,測平均光密度,計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。觀察MPTP損傷對食蟹猴嗅球凋亡信號的影響。
　　結(jié)果與對照組比較,MPTP組 Bcl2陽性物質(zhì)減少,caspase3陽性物質(zhì)增多,提示細(xì)胞凋亡異常,呈上升。
　　結(jié)論:食蟹猴嗅球的組織結(jié)構(gòu)是環(huán)狀的多層結(jié)構(gòu)。
　　MPTP損傷造成了食蟹猴嗅球神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的減少。
　　MPTP損傷造成了食蟹猴嗅球膠質(zhì)細(xì)胞的增生和炎癥反應(yīng),免