酒精對(duì)兔骨髓間質(zhì)充干細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 近年來，飲酒已經(jīng)成為日常生活中不可缺少的活動(dòng)，因酒精中毒導(dǎo)致的股骨頭壞死表現(xiàn)出逐年增加的趨勢(shì)，現(xiàn)已占非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的首位。但該病的確切發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚。
　　 近年來的研究發(fā)現(xiàn)，在骨髓中除了造血干細(xì)胞之外還存在著一種間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，其具有多向分化的潛能，在特定的條件下能夠分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及神經(jīng)

2、細(xì)胞等。已有實(shí)驗(yàn)證明大劑量的酒精不僅會(huì)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化，還能夠影響骨組織內(nèi)神經(jīng)纖維中神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，抑制其對(duì)組織成骨能力的促進(jìn)作用，進(jìn)一步導(dǎo)致機(jī)體骨形成及骨愈合能力下降，引起骨和血管組織的損傷及凝血機(jī)制的改變，繼而發(fā)生股骨頭的缺血性壞死。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，酒精能夠影響動(dòng)物骨組織內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)在神經(jīng)纖維中的表達(dá)，而本實(shí)驗(yàn)則主要通過體外分離培養(yǎng)BMSCs，細(xì)胞傳代后加入酒精進(jìn)行干預(yù)，采用分子生物學(xué)檢測方法，觀察酒精對(duì)BMSCs中多種

3、神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響，從而進(jìn)一步探討酒精性股骨頭壞死的機(jī)制。
　　 方法：
　　 取兔四肢長骨骨髓，經(jīng)密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)后，獲得原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。將傳代培養(yǎng)的第3代細(xì)胞隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組于培養(yǎng)基中加入0.09mol/L酒精，對(duì)照組無特殊處理。分別于酒精誘導(dǎo)后第4，7，11，15天提取RNA，運(yùn)用RT-PCR及熒光定量PCR技術(shù)測定細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長因子(fibrocyte growth factor,FGF)、

4、降鈣素相關(guān)基因肽受體(calcitontin gene-related peptide receptor,CGRPR)、血管活性腸肽受體(vasoactive intestinal peptide receptor,VIPR)、神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）、P物質(zhì)受體（substance P receptor,SPR）和成脂轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖子活化受體γ(peroxisom proliferato

5、r-activeted receptor-γ，PPARγ)的mRNA表達(dá)，并在第14天檢測培養(yǎng)液中骨鈣素(osteocalcin，OCN)的含量和細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)組內(nèi)FGFmRNA、CGRPRmRNA、VIPRmRNA、NGFmRNA和SPRmRNA表達(dá)，以及ALP活性和OCN含量，均較對(duì)照組明顯降低，而PPARγmRNA的表達(dá)較對(duì)照組