兔骨髓間充質干細胞對喉返神經損傷后修復的研究.pdf

1、摘要目的：1利用全骨髓貼壁的實驗方法，體外分離、培養(yǎng)并鑒定兔骨髓間充質干細胞，探討依據此方法制作一種簡便高效的細胞培養(yǎng)方案的可行性。2成功建立兔左側喉返神經損傷的動物模型，并將適量的骨髓間充質干細胞移植到喉返神經組織受損區(qū)域，一段時間后，對比觀察其對喉返神經損傷后的修復有無促進作用。方法：1采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離兔骨髓間充質干細胞，傳代培養(yǎng)，通過計數法繪制P。代細胞的貼壁率曲線及生長曲線，并通過證實獲取細胞具有干細胞的多向分化潛能，反

2、向鑒定細胞為骨髓間充質干細胞。2暴露左側喉返神經并在手術顯微鏡下垂直喉返神經縱軸方向切斷1／2直徑寬度后，即刻向損傷區(qū)域注入預先備好的骨髓間充質干細胞，分別于損傷前、損傷即刻及損傷4周后測量喉返神經復合動作電位，分析比較統(tǒng)計學意義。4周后制作并觀察喉返神經病理切片。結果：1原代細胞接種24h貼壁，6天后大量增殖；P。代細胞2h貼壁30％以上，12h貼壁90％。細胞生長曲線呈S型，細胞分別在第2、3、8天，進入潛伏期、對數期和平臺期。細胞

3、向成骨及脂肪細胞方向誘導后，試劑染色呈陽性反應。2喉返神經損傷4周后，將移植組動作電位與假移植組的動作電位進行配對t檢驗，結果為P=O047005，顯示兩組間存在統(tǒng)計學差異，病理切片對比可見，假移植組的神經組織變性較移植組嚴重。結論：1全骨髓貼壁法可操作性強，實驗結果重復性強，所獲得的骨髓間充質干細胞純度高，活性強，增殖快且數量較充足，是一種簡便高效的培養(yǎng)方法。2采用神經組織橫向半切法可以簡便有效的建立兔喉返神經損傷的動物模型，移植后的

4、骨髓間充質干細胞對喉返神經損傷組織的修復具有一定的促進作用。碩士研究生：宋明艷(耳鼻咽喉科學)指導教師：李娜教授關鍵詞：骨髓間充質干細胞；全骨髓貼壁法；移植；喉返神經目錄弓I言”1第一部分兔骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定研究”21材料與方法“211實驗材料2111實驗動物2112主要儀器設備2113主要試劑3114主要試劑配制與分裝”412實驗方法”4121原代獲取方法4122原代接種及培養(yǎng)方法5123骨髓間充質干細胞傳代方法512