健康婦女下生殖道解脲脲原體及其分群分型研究.pdf

1、解脲脲原體(UU)是一類介于細(xì)菌和病毒之間，沒有細(xì)胞壁，目前能在人工培養(yǎng)基上生長繁殖的最小原核微生物。近年來多項研究證明它與女性泌尿生殖道的非淋菌性尿道炎、子宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎等有關(guān)，與圍生期的并發(fā)癥如絨毛膜羊膜炎、流產(chǎn)、早產(chǎn)、低體重兒等亦有密切關(guān)系。然而亦有學(xué)者認(rèn)為它屬于陰道正常菌群，是一種條件致病菌，多與宿主共存，僅在某些條件下可引起機(jī)會性感染，且常合并其他致病原共同致病。 已有研究表明在性成熟無癥狀的女性下生殖道

2、中UU分離率高達(dá)19.08％-60.90％，而懷孕婦女檢出率更高，達(dá)73％-80％。雖然UU在婦女泌尿生殖道中有很高的分離率，但僅部分婦女出現(xiàn)泌尿生殖道炎癥癥狀。臨床中更常對在宮頸分泌物中檢測出UU的婦女投入大量抗生素，結(jié)果是UU反復(fù)出現(xiàn)陽性，稱之為“UU耐藥”。對于UU陽性的婦女，如何區(qū)分感染者和正常攜帶者，是臨床中亟待解決的問題。部分研究提示對于UU的進(jìn)一步定量和分型是判斷感染與攜帶的關(guān)鍵。 研究認(rèn)為高定量值的UU與感染有關(guān)

3、，但根據(jù)何種定量值來判斷是感染狀態(tài)還是攜帶狀態(tài)，有沒有必要采取治療措施，這仍有待于進(jìn)一步的臨床研究來進(jìn)行探討。UU分為兩個生物群和14種血清型，即U.parvum(以前的Biovar1/parvum群，包括血清型1、3、6、14)和U.urealyticum(以前的Biovar2/T960群，包括血清型2、4、5、7～13)。有研究指出由于不同血清型的UU毒力不同，其致病性亦不同，U.urealyticum或某些血清型更容易致病。

4、 UU檢測方法包括培養(yǎng)法、免疫學(xué)方法和分子生物學(xué)方法。實時熒光定量PCR法(FQ-PCR)屬于分子生物學(xué)方法，是國外近年發(fā)展起來的新的核酸檢測技術(shù)，具有敏感性好、自動化和程序化、速度快等優(yōu)點，適合大樣本臨床應(yīng)用。 而在UU的分型方法學(xué)上，基于抗UU血清型單克隆抗體的血清學(xué)分型研究發(fā)展最早，但由于抗血清制備繁瑣，不同抗血清型的單克隆抗體之間有不同程度的交叉反應(yīng)，缺乏可重復(fù)操作性，在臨床上一直未得到廣泛應(yīng)用。目前的熱點在基于多條帶

5、抗原(MB抗原)基因的UU分群或分型研究。MB抗原是UU的主要外膜抗原，MB抗原基因既包含有血清分群，也包含有各個血清型確定性區(qū)域，因而被選擇作為特異性目標(biāo)序列加以擴(kuò)增。我們根據(jù)UU各標(biāo)準(zhǔn)菌株的MB抗原基因間序列差異自行設(shè)計引物和探針，使用反相斑點雜交分析法(RDB)對UU進(jìn)行分型。 研究目的本研究采用FQ-PCR方法進(jìn)行宮頸分泌物UUDNA檢測，了解健康婦女下生殖道UU攜帶情況和定量值；采用RDB法進(jìn)行UU血清型鑒定，揭示正常

6、攜帶狀態(tài)下UU的血清型分布，以獲得健康婦女下生殖道UU血清型的流行病學(xué)資料，為其防治和進(jìn)一步深入研究打下基礎(chǔ)。 材料與方法1研究對象選擇2005年4月～8月在中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的婦女，無泌尿生殖道炎癥癥狀，婦科檢查陰道粘膜粉紅色，白帶清白或淡黃色，量少或量中，無明顯陰道炎體征，年齡≤55歲。選擇符合上述標(biāo)準(zhǔn)者1018例，全部病例詳細(xì)登記病史，常規(guī)婦科檢查。 2、熒光定量檢測1018例體檢婦女用棉拭子取樣

7、法采集宮頸管分泌物標(biāo)本，提取DNA，用PE9700熒光定量PCR儀進(jìn)行UU、CT熒光定量檢測。 3、反相斑點雜交采用RDB法對UU陽性的標(biāo)本進(jìn)行分群和血清型鑒定。 4、陽性標(biāo)本的DNA序列測定臨床檢測分出血清型的陽性標(biāo)本，隨機(jī)抽取18份行DNA測序以證實RDB檢測方法的正確性。 結(jié)果1、解脲脲原體的熒光定量檢測結(jié)果1.1健康婦女1018例，UU陽性371例占36.4％(其中UU與CT混合陽性44例占4.3％)，此

8、外，檢出CT陽性80例占7.9％。UU陽性、陰性婦女平均年齡比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。UU陽性婦女的妊娠次數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)與陰性婦女比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義。隨著妊娠次數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)逐漸增多，UU的陽性率呈逐漸上升的趨勢。隨著宮頸糜爛程度逐漸加重，UU的陽性率呈逐漸上升的趨勢。UU陽性婦女的分娩次數(shù)、職業(yè)構(gòu)成及節(jié)育措施構(gòu)成與陰性婦女比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義。 1.2371例UU陽性標(biāo)本中，F(xiàn)Q-PCR＜1×106copy/ml319例(86.0％

9、)，F(xiàn)Q-PCR≥1×106copy/ml52例(14.0％)；UU單獨陽性327例(88.1％)，UU混合CT陽性44例(11.9％)。下生殖道UUFQ-PCR＜1×106copy/ml的婦女其單獨陽性的概率(90.6％)較FQ-PCR≥1×106copy/ml的婦女高(73.1％)；而UUFQ-PCR≥1×106copy/ml的婦女，其混合陽性的概率(26.9％)較FQ-PCR＜1×106copy/ml的婦女高(9.4％)，差別有統(tǒng)

10、計學(xué)意義(P=0.000)。 1.3將資料作二分類Logistic回歸分析，篩選出對UU陽性有顯著性意義的影響因素為：(1)流產(chǎn)次數(shù)，1次流產(chǎn)的OR值為1.370，P=0.035；2次流產(chǎn)的OR值為2.462，P=0.000；≥3次流產(chǎn)的OR值為2.734，P=0.005。(2)年齡，OR值為0.969，P=0.001。整個回歸模型檢驗x2=32.777，P=0.000，有統(tǒng)計學(xué)意義。 2、解脲脲原體血清型檢測結(jié)果2.1

11、371例UU陽性標(biāo)本，可以檢測出血清型的共337例，未檢出34例，總檢出率為90.8％。U.parvum群278例占82.5％，U.urealyticum群30例占8.9％，兩群混合陽性29例占8.6％。U.parvum群中血清1型單型別陽性50例(18.0％)，血清3型單型別陽性81例(29.1％)，血清6型單型別陽性111例(39.9％)，血清14型單型別陽性4例(1.4％)，多型別陽性32例(11.5％)。在健康婦女中血清型分布以

12、U.parvum群為主，并且以U.parvum群中的血清1、3、6型單型別為主。 2.2下生殖道UU定量＜1×106copy/ml的婦女，U.parvum群單獨陽性率(86.7％)較UU定量≥1×106copy/ml的婦女高(59.6％)；而UU定量≥1×106copy/ml的婦女，U.urealyticum群陽性率(173％)以及兩群混合陽性的概率(23.1％)較UU定量＜1×106copy/ml的婦女(7.4％、6.0％)高

13、，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。 3、陽性標(biāo)本的DNA序列測定18份RDB檢測陽性標(biāo)本的測序結(jié)果均為相應(yīng)的UU血清型。 結(jié)論1、UU在健康婦女下生殖道中存在無癥狀的攜帶狀態(tài)，UU的陽性率受年齡、妊娠、流產(chǎn)次數(shù)等因素影響。 2、在健康婦女中，UU主要表現(xiàn)為UU定量＜1×106copy/ml且UU呈單獨陽性，即提示當(dāng)檢測出UU定量＜1×106copy/ml且UU呈單獨陽性時，UU屬于正常攜帶狀態(tài)。 3、