解脲脲原體感染對大鼠生殖細胞的影響及干預治療的研究.pdf

1、目的：探討解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，UU)對生殖細胞的影響及抗生素治療對解脲脲原體感染的作用。為探討UU導致男性不育的機制提供依據(jù)及為臨床治療男性不育提供新思路。
　　方法：
　　(1)選用清潔級成年SD大鼠，隨機分為對照組、7天組、14天組和治療組，對照組24只大鼠，其余各組12只。7天組、14天組和治療組每只大鼠經(jīng)膀胱注射0.6ml的107CCU/ml UU菌液，對照組給予等體積的UU液體

2、培養(yǎng)基。治療組于注射后第七天給予美滿霉素灌胃治療。對照組和7天組于注射后7天，對照組、14天組和治療組于注射后14天，分別用20％烏拉坦麻醉大鼠后打開腹腔，獲取血液及睪丸組織進行研究。
　　(2)用電子天平稱取大鼠左右側(cè)睪丸的重量。
　　(3)提取各組睪丸組織DNA，經(jīng)PCR擴增UU特異性的脲酶基因片段，瓊脂糖電泳檢測。
　　(4)各組睪丸組織用Bouin’s固定液固定16~18小時，HE染色觀察睪丸組織病理變化；TU

3、NEL法檢測細胞凋亡；免疫組化法檢測凋亡蛋白Bak、Bax、FasL。
　　(5)用化學發(fā)光法檢測各組大鼠血漿及睪丸間質(zhì)液中睪酮水平。
　　(6)各組睪丸組織用2%戊二醛固定2小時以上，透射電鏡觀察睪丸生精細胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　(1) UU感染后，在7天組、14天組和治療組大鼠的睪丸組織中檢測到UU特異性脲酶基因片段，而對照組未見。
　　(2) UU感染7天組大鼠的睪丸重量稍低于其它各組，然而各

4、組間睪丸的重量并無統(tǒng)計學意義。
　　(3) HE染色顯示7天組和14天組大鼠的睪丸組織呈炎癥性病理變化，曲細精管生精細胞層次和數(shù)量減少，基底膜破壞，炎細胞浸潤，成熟精子減少，但14天組睪丸組織炎癥性病變較7天組輕，而治療組睪丸組織結(jié)構(gòu)接近正常。
　　(4) UU感染后，7天組大鼠睪丸間質(zhì)液中睪酮水平明顯低于其它各組(P<0.01)，14天組、治療組和對照組之間睪酮水平無統(tǒng)計學意義。
　　(5) UU感染后，7天組和14

5、天組大鼠血漿中睪酮水平明顯低于對照組和治療組(P<0.01)，14天組血漿中睪酮水平高于7天組(P<0.05)。
　　(6) TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)，7天組、14天組和治療組大鼠生精細胞凋亡率較對照組明顯升高(P<0.01)；與治療組相比，7天組和14天組生精細胞凋亡率均明顯升高(P<0.01)，且7天組生精細胞凋亡率明顯高于14天組(P<0.01)。
　　(7)透射電鏡檢測發(fā)現(xiàn)，UU感染7天組和14天組生精細胞的細胞核染色質(zhì)

6、出現(xiàn)濃縮、聚集化等凋亡表現(xiàn)，7天組生精細胞核膜皺縮，細胞核破裂，14天組細胞核染色質(zhì)濃縮、聚集化有減輕的趨勢。治療組生精細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)較為完整。
　　(8)免疫組化檢測大鼠睪丸組織的凋亡蛋白Bak、Bax、FasL發(fā)現(xiàn)：7天組、14天組和治療組Bak蛋白均較對照組明顯升高(P<0.01)，且7天組和14天組Bak蛋白表達均高于治療組(P<0.01或P<0.05)；與對照組和治療組相比，7天組和14天組Bax蛋白表達均明顯升高(P<0

7、.01)，且7天組明顯高于14天組(P<0.05)；與對照組相比，7天組、14天組和治療組FasL蛋白表達均升高(P<0.01或P<0.05)，但7天組和14天組的FasL蛋白表達高于治療組(P<0.01或P<0.05)，且7天組明顯高于14天組(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1) UU感染可導致大鼠睪丸組織出現(xiàn)病理性改變。
　　(2) UU感染可導致大鼠睪丸組織生精細胞的細胞凋亡率及凋亡蛋白表達升高，表明UU感