安徽部分地區(qū)病雞中CAV的血清學(xué)調(diào)查及病毒分離鑒定.pdf

1、雞傳染性貧血病毒（chicken anemia virus，CAV）主要引起雞胸腺、骨髓等免疫器官發(fā)生病變，從而導(dǎo)致免疫抑制，容易繼發(fā)其他病原微生物感染。我們對(duì)送檢本實(shí)驗(yàn)室的病雞通過(guò)CAV抗體陽(yáng)性率調(diào)查，病毒分離和動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)等方法，初步了解安徽省部分地區(qū)發(fā)病雞群中CAV感染狀況，為防控雞傳染性貧血病提供參考。
　　首先，本研究應(yīng)用IDEXX雞傳染性貧血病病毒抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)來(lái)自安徽省126個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的共228份雞血清進(jìn)行檢測(cè)。

2、結(jié)果顯示，126個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中CAV抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性為70.63％。228份血清樣品中有145份呈CAV抗體陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為63.60%。根據(jù)血清樣本來(lái)源顯示，皖南地區(qū)CAV抗體陽(yáng)性率為60%，皖中地區(qū)為64.46%，皖北地區(qū)為62.22%。不同品種雞中肉雞CAV抗體陽(yáng)性率為42.86%、蛋雞品種為51.52%、土雞抗體陽(yáng)性率為70.83%；不同日齡病雞中，1-50日齡CAV抗體陽(yáng)性率52.22%，50-100日齡抗體陽(yáng)性率為58.82%，1

3、00-150日齡抗體陽(yáng)性率為58.06%，150-200日齡抗體陽(yáng)性率為86.21%，200日齡以上的抗體陽(yáng)性率相對(duì)最高，為90%。
　　其次，對(duì)CAV抗體檢測(cè)陽(yáng)性且肝臟出現(xiàn)腫瘤樣結(jié)節(jié)的病雞，制備病理組織切片，提取肝組織DNA，以PCR方法檢測(cè)CAV及可能混感的病毒。對(duì)2份CAV檢測(cè)陽(yáng)性的病料液孵育MDCC-MSB1細(xì)胞，觀察細(xì)胞病變。結(jié)果顯示，病理組織切片染色結(jié)果可見明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；擴(kuò)增結(jié)果表明CAV與ALV-J、MDV存在

4、混合感染，從9份腫瘤中檢測(cè)出8份CAV，其中有5份和ALV-J檢測(cè)雙陽(yáng)性，對(duì)其中2份腿肌出血、胸腺明顯萎縮的陽(yáng)性樣品中CAV凋亡素（VP3）基因序列進(jìn)行同源性分析表明，AHCH-CAV1與EF176599（山東株）同源性最高為100%，而AHCH-CAV2與M55918（德國(guó)株）和EF17659（山東株）同源性均為99.4%。
　　最后，將上述PCR鑒定CAV陽(yáng)性的2個(gè)樣品經(jīng)氯仿和雙抗處理后孵育MDCC-MSB1細(xì)胞并盲傳，在光學(xué)

5、顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，并提取DNA進(jìn)行PCR鑒定；將細(xì)胞毒通過(guò)卵黃囊接種6d SPF雞胚，并通過(guò)腿肌注射1日齡SPF雛雞進(jìn)行回歸實(shí)驗(yàn)，觀察剖檢病變并通過(guò)PCR檢測(cè)CAV。結(jié)果顯示，病料液處理的MDCC-MSB1細(xì)胞在第二代和第四代細(xì)胞均出現(xiàn)明顯腫脹、死亡等細(xì)胞病變。PCR檢測(cè)結(jié)果CAV為陽(yáng)性；在回歸試驗(yàn)中，接種13d后，少數(shù)雞胚發(fā)育明顯受阻，胚體小于對(duì)照組，但多數(shù)病變不明顯。1日齡雛雞在接種細(xì)胞毒21d時(shí)剖檢，可見腿肌明顯出血、胸腺明顯