胞漿型磷脂酶A2活化表達與高血壓心臟重構關系的研究.pdf

1、目的：探討活化的胞漿型PLA2與高血壓心臟重構的關系，本研究利用電鏡觀察4、8、16、24周齡SHR左心室心肌細胞超微結(jié)構變化，圍繞ERK1/2的調(diào)節(jié)通路，免疫組化法檢測不同周齡SHR左心室壁（內(nèi)縱層、中環(huán)層、外斜層）、室間隔ERK1/2下游調(diào)節(jié)因子cPLA2的表達，Western-blotting法檢測p-cPLA2，p-MEK，p-ERK1/2的表達，從細胞信號通路轉(zhuǎn)導方面分析高血壓狀態(tài)下cPLA2是否參與了高血壓心臟重構，進一步明

2、確ERK1/2參與高血壓心臟重構作用的可能調(diào)節(jié)機制。
　　方法：動物分組：①原發(fā)性高血壓（SpontaneouslyHypertensiveRats，SHR）組：4周齡組（SHR4），8周齡組（SHR8），16周齡組（SHR16），24周齡組（SHR24），每組各6只；②WKY（Wistar-Kyoto）大鼠作為對照組：4周齡組（WKY4），8周齡組（WKY8），16周齡組（WKY16），24周齡組（WKY24），每組各6只。HE

3、染色，光鏡測微尺測量4、8、16、24周齡SHR心臟重構改變，觀察組織學改變，利用透射電鏡觀察各年齡段SHR心肌超微結(jié)構變化，免疫組化法檢測不同周齡SHR大鼠左心室壁（內(nèi)縱層、中環(huán)層、外斜層）、室間隔p-cPLA2的表達，Western-blotting法檢測cPLA2，p-MEK，p-ERK1/2的表達。
　　結(jié)果：1、血壓變化：WKY血壓保持在正常水平（107.65±6.55mmHg）。SHR組從8周齡開始血壓升高，SHR8、

4、SHR16、SHR24組動脈收縮壓均明顯高于同周齡WKY組（P<0.05）；2、心臟/體重比值改變：隨著大鼠周齡的增加SHR和WKY大鼠的心臟/體重比值逐漸增加，16、24周齡SHR的心臟/體重比值明顯高于4周齡SHR（P<0.05）,與同周齡WKY大鼠比值比較，16、24周齡SHR的心臟/體重比值明顯高于WKY大鼠（P<0.05）；心臟相對腔室厚度變化：SHR組相對左心室壁厚度隨周齡增加，逐漸增加，以左心室肌內(nèi)層和中層厚度增加明顯，1

5、6、24周SHR相對左心室壁厚度明顯高于16、24周WKY大鼠（P<0.05）。16、24周齡SHR組相對左心室壁厚度明顯高于SHR4組（P<0.05）；組織學改變：心肌組織HE切片觀察，正常血壓對照組WKY組大鼠心肌排列整齊，基本結(jié)構清晰。與之相對應SHR組心臟基本結(jié)構存在，心肌排列整體比較整齊，個別區(qū)域心肌排列紊亂，心肌細胞體積普遍增大，心肌細胞長度增加，偶見雙核。SHR組心肌間質(zhì)血管壁較WKY組明顯增厚。3、心肌超微結(jié)構變化：WK

6、Y組心肌肌膜光滑平坦，線粒體、潤盤無明顯病理表現(xiàn)，間質(zhì)血管正常。與之相比較，8、16周齡SHR心肌細胞內(nèi)可見膨脹增大的線粒體，基質(zhì)內(nèi)嵴結(jié)構模糊，部分線粒體呈羽毛狀溶解壞死。肌漿網(wǎng)池擴張不平坦呈泡狀突出，少部分線粒體溶解，到SHR24上述心肌細胞變化更為明顯。SHR24潤盤明顯減少，部分潤盤局部縫隙有擴張，可見異常球形膨大，潤盤走行紊亂屈曲；SHR心肌間毛細血管內(nèi)皮細胞增生明顯，血管壁明顯增厚，血管腔狹窄變形；心肌間質(zhì)及血管旁可見增生的成

7、纖維細胞，膠原增多。4、磷酸化cPLA2在心臟各部位的檢測結(jié)果：磷酸化cPLA2免疫組組織化學陽性表現(xiàn)為心肌細胞細胞漿內(nèi)有棕黃色或淡黃色顆粒沉著，隨實驗大鼠的周齡與心臟部位不同，其表達范圍也不同，大鼠心臟左心室壁和室間隔，磷酸化cPLA2在SHR的表達均隨周齡的增加逐漸增加，心室壁各層表達情況:在左心室壁內(nèi)層SHR16、SHR24的表達陽性率分別為76.38％、78.56%，明顯高于WKY16、WKY24陽性率51.52%、53.74%

8、；在左心室壁中層SHR16、SHR24的表達陽性率分別為75.03%、82.03%，明顯高于WKY16、WKY24大鼠陽性率46.51%、55.67%；在左心室壁外層SHR24的表達陽性率78.53%，明顯高于WKY24大鼠陽性率56.74%；磷酸化cPLA2在室間隔與在左心室壁上的表達規(guī)律不同：SHR24組大鼠的室間隔左心室面磷酸化cPLA2表達陽性率50.12%，明顯高于WKY24組表達陽性率29.87%；室間隔右心室面磷酸化cPL

9、A2表達各組無顯著性差異；磷酸化cPLA2在SHR4的左心室壁內(nèi)層和中層的表達明顯高于室間隔左、右心室面的表達（P<0.05）。在SHR24大鼠左心室壁的內(nèi)、中、外三層的表達陽性率明顯高于室間隔右心室面的陽性率（P<0.05），室間隔左心室面的表達與右心室面的表達無顯著性差異。5、Westernblot檢測也證明了隨周齡增加SHR心臟中磷酸化cPLA2蛋白含量逐漸增高這一結(jié)果。6、大鼠心臟磷酸化MEK檢測結(jié)果:SHR24心臟中磷酸化ME

10、K1/2蛋白含量高于SHR8，SHR24心臟中磷酸化MEK1/2蛋白含量較WKY24組大鼠高。7、大鼠心臟磷酸化ERK檢測結(jié)果:SHR24心臟中磷酸化ERK1/2蛋白含量高于SHR8，SHR24心臟中磷酸化ERK1/2蛋白含量較WKY24組大鼠高。
　　結(jié)論：（1）SHR高血壓大鼠心臟重構以左心室肥厚為主。（2）心肌細胞增殖/凋亡失衡，心肌間血管重構和心肌纖維化共同參與了SHR心臟重構。（3）MEK1/2-ERK1/2-cPlA2