胞漿磷脂酶A2參與高血糖加重腦缺血性損傷的初步研究.pdf

1、目的： 研究糖尿病高血糖全腦缺血再灌注大鼠模型海馬組織神經(jīng)細胞凋亡及胞漿磷脂酶A2（cytoplasm phospholipase A2，cPLA2）的激活表達，探討高血糖加重腦缺血性損傷的分子機制。 方法： SD大鼠隨機分為①假手術(shù)對照組（簡稱Sham）；②正常血糖腦缺血組(簡稱NCI)；③糖尿病腦缺血組(簡稱DCI)；④PD98059預(yù)防糖尿病腦缺血組(簡稱PD)。采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎并放血法制備全腦缺血模型

2、，各缺血組再按照缺血15min，再灌注1h、3h、6h亞組觀察。采用組織病理學(xué)、TUNEL、免疫組織化學(xué)和蛋白印跡等方法，對比觀察海馬神經(jīng)細胞的調(diào)亡、以及MAPK激酶（MEK）和cPLA2的磷酸化狀態(tài)。 結(jié)果： (1)腦組織神經(jīng)元凋亡：NCI組海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)多數(shù)神經(jīng)細胞發(fā)生凋亡，除個體差異影響外，大多數(shù)模型隨著再灌注時間的逐漸延長凋亡細胞數(shù)增加；與NCI組相比，DCI組海馬CA1、CA2、CA3、CA

3、4區(qū)神經(jīng)細胞發(fā)生凋亡的數(shù)目增多，并隨著再灌注時間的逐漸延長海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)神經(jīng)細胞發(fā)生調(diào)亡的數(shù)目增加；而Sham組腦組織海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)全腦缺血再灌注各時間點可見少量凋亡神經(jīng)細胞。（2）磷酸化MEK1/2免疫組化及Western blot結(jié)果：觀察糖尿病腦缺血全腦缺血15分鐘，再灌注1、3、6小時各時間點腦組織海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)神經(jīng)細胞磷酸化MEK1/2的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在N

4、CI組磷酸化MEK1/2在各時間點均有表達，但與Sham組相比無差異；DCI組在全腦缺血15分鐘、再灌注1、3、6小時各時間點腦組織海馬CA2區(qū)幾乎所有神經(jīng)細胞都發(fā)生了凋亡改變。采用MEK1/2的特異性阻斷劑PD98059后，海馬CA1、CA2、CA3和CA4各區(qū)神經(jīng)細胞磷酸化MEK1/2表達受到抑制；同時也可見使用PD98059后，能夠明顯減少DCI組全腦缺血15分鐘、再灌注1、3、6小時各時間點腦組織海馬CA1、CA2、CA3和CA

5、4各區(qū)神經(jīng)細胞凋亡。（3）cPLA2免疫組化結(jié)果：DCI組全腦缺血15分鐘時，海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)中神經(jīng)細胞cPLA2的表達情況與Sham組和NCI組比較陽性表達顯著增加；而在再灌注3小時，cPLA2在海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)神經(jīng)細胞的表達結(jié)果顯示，DCI組比Sham組明顯增多。同時也發(fā)現(xiàn)，在使用PD98059后，能夠減少糖尿病腦缺血全腦缺血15分鐘、再灌注1、3、6小時各時間點腦組織海馬CA1、CA2、CA